مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0180M، XmaI

تمت إعادة صياغة XmaI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10180742. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة TZ، إنزيمات قطع محددة موفرة للوقت. التطبيقات: الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB. مواصفات هضم إنزيم القطع: تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من pXba في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 25%، NEBuffer™ r2.1: 50%، NEBuffer™ r3.1: <10%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف أ: محلول التخزين ، 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 50 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 0.1 ملي مولار إيدتا، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل حراري عند 25 درجة مئوية، ثم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: ضعيفة. الأسئلة الشائعة : س: هل نشاط XmaI حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. قد لا يتمكن XmaI من قطع مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي تحتوي على مثيلة CpG. للحصول على معلومات محدثة حول حساسية المثيلة، يرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: كم عدد أزواج القواعد التي يجب إضافتها في نهاية بادئ PCR بعد موقع تعرف XmaI لضمان قطع XmaI بشكل صحيح؟ ج: يوصى بإضافة 6 أزواج من القواعد. س: هل يوجد لـ XmaI أي متصاوغات متماثلة/متصاوغات جديدة؟ ج: نعم. إنزيم TspMI هو إنزيم متماثل الشكل (isoschizomer) وإنزيم SmaI هو إنزيم جديد متماثل الشكل (neoschizomer) من إنزيم XmaI. للحصول على أحدث المعلومات حول الإنزيمات المتماثلة الشكل/الجديدة الشكل، يُرجى الرجوع إلى قاعدة بيانات REBASE. س: هل يُظهر إنزيم XmaI نشاطًا فائقًا؟ ج: في ظروف انخفاض القوة الأيونية، وارتفاع تركيز الإنزيم، وتركيز الجلسرين > 5%، ودرجة حموضة > 8.0، أو فترات حضانة طويلة، قد يُظهر إنزيم XmaI نشاطًا فائقًا. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المعتمدة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يُمكنني إجراء عملية الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مُصممة ومُعتمدة لتحمّل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: اختبرتُ إنزيم التقييد الخاص بكم على الحمض النووي الركيزة الموصى به من قِبل NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي يُمكن أن تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبَّط إنزيمات القطع النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلولي NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات التركيز الملحي العالي)، بفعل الملح في التفاعل. قد تُنتج إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي محاليل حمض نووي ذات مستويات عالية من الملح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبِّط نشاط الإنزيم. ولمنع ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: ما هي إنزيمات القطع من NEB المُزوَّدة بصبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X)؟ ج: جميع إنزيمات القطع HF ومعظم إنزيمات القطع غير HF من NEB مُزوَّدة بصبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل الصبغ، الأرجواني (6X) س: هل يمكنك معرفة ذلك هل يمكنك إخباري بالمزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري المصل (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1، وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1، وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.