مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0197S، ClaI

تمت إعادة صياغة ClaI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10119493. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة CG، تطبيقات إنزيمات القطع المحددة الموفرة للوقت: الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ باستخدام الكواشف من NEB، مواصفات هضم إنزيم القطع، تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ (dam-) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 10%، NEBuffer™ r2.1: 50%، NEBuffer™ r3.1: 50%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف A، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 50 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل حراري عند 25 درجة مئوية، ثم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: محجوبة بتداخل مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: محجوبة. الأسئلة الشائعة: س: هل ClaI حساس للمثيلة؟ ج: نعم، يتم حجبه بتداخل مثيلة dam، وبمثيلة CpG في جميع المواقع. للحصول على معلومات محدثة حول حساسية المثيلة، يرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل ينتج ClaI نهايات متوافقة شائعة الاستخدام؟ ج: يقوم BspDI بالقطع ليترك 5´GC يمكن ربطه بالشظايا الناتجة عن AccI، BspDI، BstBI، TaqI، AciI، BsaHI، HinP1I، HpaII، NarI، Psp1406I. س: ما هو نشاط ClaI عند 25 درجة مئوية؟ ج: تبلغ فعالية ClaI من 25 إلى 50% عند درجة حرارة 25 درجة مئوية. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المعتمدة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: اختبرت إنزيم التقييد الخاص بكم على الحمض النووي الركيزة الموصى به من NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبط الأملاح الموجودة في التفاعل إنزيمات التقييد النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلول NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات الملوحة العالية). قد تؤدي إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي إلى محاليل حمض نووي ذات مستويات عالية من الأملاح التي يمكن أن تنتقل إلى التفاعل وتثبط نشاط الإنزيم. لتجنب ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: ما هي إنزيمات التقييد من NEB التي تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X)؟ ج: جميع إنزيمات التقييد HF ومعظم إنزيمات التقييد غير HF من NEB تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل الصبغ، الأرجواني (6X) س: هل NEB هل تُقدم شركة NEB أي إنزيمات تقييد خالية من الألبومين البقري (BSA) و/أو من أصل حيواني لتسلسل البلازميدات في تطوير لقاحات mRNA؟ ج: نعم، قامت NEB بتطوير بعض إنزيمات التقييد (بما في ذلك BspQI، وهو نظير SapI) بدون مكونات مشتقة من الحيوانات، ولا يحتوي تركيبها النهائي على الألبومين البقري. بالإضافة إلى ذلك، لدينا العديد من إنزيمات التقييد المتاحة بدون الألبومين البقري أو أي مكونات أخرى مشتقة من الحيوانات في تركيبها النهائي. تشمل هذه القائمة: BbsI-HF، BsaI-HFv2، BspQI، وهو نظير LguI، ومتوفر الآن بدرجة GMP*، BspQI-HF، ClaI، HindIII-HF، PacI، SapI، SpeI، SwaI، XbaI، XhoI، XmnI. يمكن تطوير إنزيمات أخرى حسب الطلب. يُرجى الاستفسار هنا. * "GMP Grade" و"GMP-grade" مصطلحات تجارية تستخدمها NEB لوصف المنتجات المصنعة أو المُنجزة في منشأة NEB في رولي. صُمم مصنع رولي لتصنيع المنتجات وفقًا لبنية تحتية وضوابط عمليات أكثر صرامة، وذلك لتحقيق مواصفات منتجات أكثر دقة وتلبية متطلبات العملاء. تُصنّع المنتجات في مصنع رولي التابع لشركة NEB وفقًا لمعايير نظام إدارة الجودة ISO 9001 وISO 13485. مع ذلك، لا تقوم NEB حاليًا بتصنيع أو بيع المنتجات المعروفة باسم المكونات الصيدلانية الفعالة (APIs)، كما أنها لا تُصنّع منتجاتها بما يتوافق مع جميع لوائح ممارسات التصنيع الجيدة الحالية. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). نعمل حاليًا على تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونستطيع تقديم هذا التحسين بنفس السعر.