مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0199M، BssHII

تمت إعادة صياغة BssHII باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10235062. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة B، تطبيقات إنزيمات القطع المحددة الموفرة للوقت: الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ باستخدام الكواشف من NEB، مواصفات هضم إنزيم القطع ، تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 100%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل بالحرارة عند 25 درجة مئوية، ثم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: محظورة. الأسئلة الشائعة: س: هل توجد مواقع BssHII في pBluescript؟ ج: يوجد موقعان BssHII في pBluescript II SK (+/-) phagemid، بينما لا توجد مواقع BssHII في pBluescript SK (+/-) phagemid. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون تحلل الحمض النووي. س: هل هذا الإنزيم حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي تُحجبها مثيلة CpG. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يُمكنكم إخباري المزيد عن التحوّل من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن الابتعاد عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونُقدّم هذا التحسين بنفس السعر. س: هل تكون بعض إنزيمات القطع أكثر نشاطًا عند درجات حرارة حضانة أعلى من الموصى بها؟ ج: إنزيمات القطع من NEB فعالة بنسبة 100% عند درجة حرارة الحضانة الموصى بها في المحلول المنظم الموصى به والمرفق مع كل إنزيم. مع بعض إنزيمات القطع المعزولة من الكائنات المحبة للحرارة، قد تلاحظ زيادة في النشاط عند درجات حرارة حضانة أعلى. لا ننصح برفع درجة الحرارة، حيث قد تظهر أنشطة نوكلياز إضافية عند درجات حرارة غير موصى بها.