مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0532L، PmlI

الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة PR، إنزيمات القطع المحددة المؤهلة لتوفير الوقت، التطبيقات، مواصفات هضم إنزيم القطع، تعريف الوحدة: تُعرف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ (هضم HindIII) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 100%، NEBuffer™ r2.1: 50%، NEBuffer™ r3.1: أقل من 10%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف أ: محلول التخزين ، 25 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 25 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 0.5 ملي مولار إيديتات ثنائي الصوديوم، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مصل البقر، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية ، يُسخن. تعطيل الإنزيم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة Dam: غير حساسة، مثيلة DCM: غير حساسة، مثيلة CpG: محظورة. الأسئلة الشائعة: س: هل يتأثر إنزيم PmlI بالمثيلة؟ ج: يتم حجب إنزيم PmlI بواسطة مثيلة CpG. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يرجى زيارة صفحة مثيلة Dam-Dcm وCpG أو REBASE. س: هل يتم تثبيط إنزيم PmlI بواسطة الملح؟ ج: يتم تثبيط إنزيم PmlI بواسطة تركيزات الملح التي تزيد عن 10 ملي مولار. يجب غسل الحمض النووي المُحضر باستخدام Mini prep والذي يحتوي على بقايا ملح باستخدام 70% من الإيثانول أو إجراء عملية غسيل كلوي. س: هل يُنصح بالهضم الليلي باستخدام إنزيم PmlI؟ ج: لا، لا يُنصح بالهضم لمدة 16 ساعة لأن إنزيم PmlI يفقد نشاطه أثناء التفاعل. س: ما هو نشاط إنزيم PmlI عند 25 درجة مئوية؟ ج: يكون إنزيم PmlI نشطًا بنسبة 100% عند 25 درجة مئوية. س: هل يجب عليّ تحضير عملية الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المعتمدة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: اختبرت إنزيم التقييد الخاص بكم على الحمض النووي الركيزة الموصى به من NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبط الأملاح الموجودة في التفاعل إنزيمات التقييد النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلول NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات الملوحة العالية). قد تؤدي إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي إلى محاليل حمض نووي ذات مستويات عالية من الأملاح التي قد تنتقل إلى التفاعل وتثبط نشاط الإنزيم. لتجنب ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل حجم التفاعل الإجمالي وفقًا لذلك. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري المصل (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المؤتلف (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المؤتلف. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.