مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0540L، BspEI

تمت إعادة صياغة BspEI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10192518. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة B، إنزيمات القطع المحددة الموفرة للوقت. التطبيقات: هضم إنزيم القطع. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ (dam-) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يحتوي على: 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer : NEBuffer™ r1.1: أقل من 10%، NEBuffer™ r2.1: 10%، NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: أقل من 10% . توافق المخفف : محلول التخزين B: 10 ملي مولار Tris-HCl، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية، يُسخن. تعطيل الإنزيم عند 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: مُعاقة. مثيلة dcm المتداخلة: غير حساسة. مثيلة CpG: مُعاقة. الأسئلة الشائعة : س: هل نشاط BspEI حساس لمثيلة dam أو dcm أو CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع BspEI قطع مواقع التعرف التي تحتوي على مثيلة dam متداخلة. في الحمض النووي الجينومي للثدييات، لا يستطيع BspEI قطع المواقع التي تحتوي على مثيلة CpG. للحصول على معلومات مُحدثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة صفحة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: كم عدد أزواج القواعد التي يجب إضافتها في نهاية بادئ PCR بجوار موقع تعرف BspEI لضمان قطع BspEI بشكل صحيح؟ ج: يُوصى بإضافة 6 أزواج من القواعد. س: هل يحتوي BspEI على أي مُتَشَوِّهات جديدة؟ ج: لا. للحصول على أحدث المعلومات حول الإيزوشيزومرات/النيووشيزومرات، يُرجى الرجوع إلى REBASE. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المعتمدة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومعتمدة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المؤتلف (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). نعمل حاليًا على تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونستطيع تقديم هذا التحسين بنفس السعر.