مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0542S، BcoDI

تمت إعادة صياغة BcoDI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10196886. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة B، تطبيقات إنزيمات القطع المحددة الموفرة للوقت: الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB، مواصفات هضم إنزيم القطع، تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 50%، NEBuffer™ r2.1: 75%، NEBuffer™ r3.1: 75%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 200 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل حراري عند 37 درجة مئوية، لا حساسية للمثيلة، مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: تتأثر ببعض تركيبات التداخل. الأسئلة الشائعة : س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون تحلل الحمض النووي. س: هل شظايا الحمض النووي الناتجة عن بوليميراز الحمض النووي Vent ذات نهايات غير لاصقة أم أنها تحتوي على قاعدة واحدة بارزة 3' كما هو الحال في بوليميراز الحمض النووي Taq؟ ج: ينتج بوليميراز الحمض النووي Vent أكثر من 95% من الشظايا ذات النهايات غير اللاصقة. أما مشتقات exo فهي أشبه ببوليميراز الحمض النووي Taq من حيث وجود نوعين رئيسيين من النهايات. 70% منها ذات نهايات غير لاصقة، بينما 30% منها عبارة عن قواعد مفردة بارزة في الطرف 3'. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ Dam أو Dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي تتأثر ببعض تركيبات مثيلة CpG المتداخلة. للحصول على معلومات محدثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من BSA إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في NEBuffers؟ يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونرى أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.