مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0543M، DpnII

تمت إعادة صياغة DpnII باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10174818. الفئات ذات الصلة: إنزيمات التقييد الحساسة للمثيلة والمعتمدة على المثيلة لعلم التخلق، إنزيمات التقييد لتحليل علم التخلق، إنزيمات التقييد الداخلية CG، التطبيقات : الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB، مواصفات هضم إنزيم التقييد، تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ (dam-) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: حضانة محلول NEBuffer™ DpnII بتركيز 1X عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ DpnII بتركيز 1X: 50 ملي مولار Bis-Tris-HCl، 100 ملي مولار NaCl، 10 ملي مولار MgCl2، 0.1 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 6 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 25%، NEBuffer™ r2.1: 25%، NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: 25%. توافق المخفف : محلول التخزين B: 10 ملي مولار Tris-HCl، 300 ملي مولار NaCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري: 65 درجة مئوية لـ حساسية المثيلة (20 دقيقة): مثيلة dam: محجوبة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. الأسئلة الشائعة: س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المعتمدة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: هل هذا الإنزيم حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف المحجوبة بمثيلة dam. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يرجى زيارة صفحة مثيلة Dam-Dcm وCpG أو REBASE. س: ما هي إنزيمات التقييد من NEB التي تأتي مع صبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X)؟ ج: يتم تزويد جميع إنزيمات التقييد HF ومعظم إنزيمات التقييد NEB غير HF بصبغة تحميل الجل، أرجوانية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل صبغ، بنفسجي (6X) س: علبة جل هل يمكن تخزين صبغة التحميل، بنفسجي 6X (B7024) في درجات حرارة منخفضة؟ ج: درجة حرارة التخزين الموصى بها لصبغة التحميل الجل، بنفسجي 6X، هي درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية). عادةً، قد يترسب كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) من المحلول عند تخزين الصبغة في درجات حرارة منخفضة. يمكن التخلص من هذا الترسب الطفيف بترك القارورة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة، أو بتسخينها برفق لمدة 10 دقائق. رجّ القارورة عدة مرات قبل الاستخدام لإعادة المحلول إلى حالته المتجانسة.