مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0545S، BcgI

تمت إعادة صياغة BcgI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10271508. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة B. التطبيقات: هضم إنزيم القطع. المواصفات: تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. المكونات: محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). نسبة النشاط في محاليل NEBuffer : محلول NEBuffer™ r1.1: 10%، محلول NEBuffer™ r2.1: 75%، محلول NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: 50%. توافق المخفف : محلول التخزين المخفف A: 10 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 0.32 ملي مولار S-أدينوسيل ميثيونين (SAM). 50% جلسرين، درجة حموضة 7.4 عند 25 درجة مئوية، تعطيل حراري عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: تتأثر بالتداخل. مثيلة dcm: غير حساسة. مثيلة CpG: تُحجب ببعض تركيبات التداخل. الأسئلة الشائعة : س: هل يتطلب BsgI وجود SAM للنشاط؟ ج: نعم، S-أدينوسيل ميثيونين (SAM) ضروري للنشاط الأمثل (يُرفق SAM في تركيبة الإنزيم اعتبارًا من أكتوبر 2020). إذا لم تكن متأكدًا مما إذا كان SAM موجودًا في تركيبة الإنزيم ولديك قارورة من SAM من NEB، فلا بأس من إضافة SAM إلى التفاعل وفقًا للإرشادات السابقة. س: هل ترتبط النهايات الناتجة عن BcgI؟ ج: يستأصل BcgI قطعة بطول 32 زوجًا قاعديًا مع نتوءات ثنائية القاعدة 3'. هذه النهايات المتدلية غير محددة، لذا فإن إمكانية ربطها تعتمد كليًا على تسلسل الحمض النووي المحدد المراد قطعه. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ Dam أو Dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف التي تتأثر بمثيلة Dam المتداخلة أو التي تُحجب ببعض تركيبات مثيلة CpG المتداخلة. للحصول على معلومات محدثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من BSA إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في NEBuffers؟ يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونرى أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.