نيو إنجلاند بيولابس، R0568L، BfaI

تمت إعادة صياغة BfaI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10155313. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة B. التطبيقات: هضم إنزيم القطع. المواصفات: تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: <10%، NEBuffer™ r2.1: 10%، NEBuffer™ r3.1: <10%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل الإنزيم بالحرارة عند 25 درجة مئوية، ثم عند 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. الأسئلة الشائعة : س: هل يعمل إنزيم BfaI بكفاءة على منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)؟ ج: لا. أظهر إنزيم BfaI قدرة ضئيلة على قطع منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل غير المنقاة. لذلك، يجب تنقية منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل قبل هضمها باستخدام إنزيم BfaI في محلول rCutSmart Buffer بتركيز 1X. س: هل يحل إنزيم BfaI محل إنزيم تم بيعه سابقًا؟ ج: نعم، يحل إنزيم BfaI محل إنزيم RmaI. س: ما هو نشاط إنزيم BfaI عند 25 درجة مئوية؟ ج: تتراوح نسبة نشاط إنزيم BfaI بين 25% و50% عند 25 درجة مئوية. س: قمتُ باختبار إنزيم القطع الخاص بكم على الحمض النووي الموصى به من قِبل شركة NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبط الأملاح الموجودة في التفاعل إنزيمات القطع النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلول NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات التركيز الملحي العالي). قد تُؤدي إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي إلى محاليل حمض نووي ذات مستويات عالية من الأملاح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبط نشاط الإنزيم. لتجنب ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. يُمكن تحقيق ذلك بتعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: هل تكون شظايا الحمض النووي التي يُنتجها إنزيم Vent DNA Polymerase ذات نهايات غير لاصقة، أم أنها تحتوي على قاعدة واحدة بارزة في الطرف 3' كما هو الحال في إنزيم Taq DNA Polymerase؟ ج: يُنتج إنزيم Vent DNA Polymerase أكثر من 95% من الشظايا ذات النهايات غير اللاصقة. تُشبه مشتقات الإكسو إنزيم بوليميراز الحمض النووي Taq من حيث وجود نوعين رئيسيين من النهايات؛ 70% منها ذات نهايات غير لاصقة، بينما 30% منها عبارة عن قاعدة مفردة بارزة في الطرف 3'. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ Dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا. هذا الإنزيم غير حساس لـ Dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات. للحصول على معلومات حديثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من BSA إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر. س: بالنسبة للإنزيمات المخزنة عند -80 درجة مئوية، هل تتأثر فعاليتها بعد عدة دورات من التجميد والذوبان؟ ج: حافظت الإنزيمات التالية على فعاليتها الكاملة عند اختبارها لعشر دورات من التجميد والذوبان. إذا كنت بحاجة إلى أكثر من عشر دورات، فننصح بتقسيم الإنزيم إلى أجزاء أصغر وتجميد كل جزء عند -80 درجة مئوية. Cac8I EagI-HF I-SceI KasI NlaIII يرجى الملاحظة: حافظ FseI على نشاطه الكامل لمدة 5 دورات تجميد/ذوبان فقط.