مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0574S، BsrDI

درجة حرارة حضانة جديدة 37 درجة مئوية. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة B، تطبيقات إنزيمات القطع المحددة المؤهلة لتوفير الوقت: الاستنساخ السريع: سرّع عمليات الاستنساخ باستخدام الكواشف من NEB، مواصفات هضم إنزيم القطع، تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: حضانة محلول NEBuffer™ r2.1 بتركيز 1X عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ r2.1 بتركيز 1X، 50 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 10 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer : NEBuffer™ r1.1: 10%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 75%، محلول rCutSmart™: 25%. توافق المخفف : محلول التخزين المخفف A: 10 ملي مولار Tris-HCl، 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تسخين. تعطيل عند 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. النشاط عند درجة حرارة 65 درجة مئوية: 100%. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط BsrDI عند 25 درجة مئوية؟ ج: يكون نشاط BsrDI حوالي 10% عند 25 درجة مئوية. س: هل توجد مواقع BsrDI منفردة في النواقل الشائعة؟ ج: نعم، يحتوي pACYC184 على موقع BsrDI منفرد. س: هل يجب عليّ إعداد عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المؤهلة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون تحلل الحمض النووي. س: هل هذا الإنزيم حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا. هذا الإنزيم غير حساس لـ Dam أو DCM أو مثيلة CpG في الثدييات. للحصول على معلومات محدثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من BSA إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل rAlbumin. ونعتقد أن الابتعاد عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونُقدم هذا التحسين بنفس السعر. س: في محاولة لتوحيد ظروف التفاعل، تم تغيير درجة حرارة التحضين الموصى بها لكل من ApaI (NEB #R0114) وBaeI (NEB #R0613) وBsrDI (NEB #R0574) وSmaI (NEB #R0141). ما هي درجة حرارة التحضين التي يجب استخدامها؟ ج: يمكنك التحضين بأمان عند أي من درجتي الحرارة. يُرجى ملاحظة أنه بالنسبة لـ SmaI، نقترح التحضين عند 25 درجة مئوية في حال إجراء عمليات هضم مطولة (أكثر من ساعة). س: هل تكون بعض إنزيمات التقييد أكثر نشاطًا عند درجات حرارة تحضين أعلى من الموصى بها؟ ج: إنزيمات التقييد من NEB نشطة بنسبة 100% عند درجة حرارة التحضين الموصى بها في المحلول المنظم الموصى به والمرفق مع كل إنزيم. مع بعض إنزيمات التقييد المعزولة من الكائنات المحبة للحرارة، قد تلاحظ زيادة في النشاط عند درجات حرارة تحضين أعلى. لا نوصي بزيادة درجة الحرارة حيث قد تظهر أنشطة نوكلياز إضافية عند درجات حرارة غير موصى بها.