نيو إنجلاند بيولابس، R0591L، TseI

تمت إعادة صياغة TseI، وهي تشمل الآن أيضًا الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10268411. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة TZ، إنزيمات قطع مؤهلة لتوفير الوقت. التطبيقات: الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB. مواصفات هضم إنزيم القطع: تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 65 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 65 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer ™: NEBuffer™ r1.1: 75%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 500 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية. تعطيل حراري عند 25 درجة مئوية، لا حساسية للمثيلة، مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: يتم حجبها بواسطة بعض تركيبات النشاط المتداخل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية: 10%. الأسئلة الشائعة : س: هل يجب أن تكون مواقع التعرف المتغيرة متناظرة؟ ج: معظم مواقع التعرف على إنزيمات التقييد متناظرة وتتضمن أزواج قواعد محددة فقط (مثل EcoRI يتعرف على GAATTC). ومع ذلك، تحتوي بعض الإنزيمات على مواقع متغيرة، مما يعني أنها تحتوي على زوج قاعدة واحد أو أكثر غير محدد بشكل خاص (مثل BsrFI-v2 يتعرف على RCCGGY، حيث R = A أو G و Y = C أو T). بالنسبة للإنزيمات المتغيرة، يمكن أن توجد أي قاعدة ممثلة برمز الحرف الواحد في أي من الموقعين في موقع التعرف لحدوث الانقسام. على سبيل المثال، يتعرف إنزيم BsrFI-v2 على جميع التسلسلات التالية: ACCGGC، ACCGGT، GCCGGC، GCCGGT. س: كيف يمكن تعطيل هذا الإنزيم؟ ج: لتعطيل الإنزيمات التي لا يمكن تعطيلها بالحرارة، نوصي باستخلاص الفينول متبوعًا بالترسيب بالإيثانول أو استخدام عمود طرد مركزي تجاري مصمم لتنقية الحمض النووي. س: هل يجب عليّ إعداد عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني إجراء عملية الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي يتم حجبها بواسطة بعض تركيبات مثيلة CpG المتداخلة. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm وCpG Methylation أو REBASE. س: هل يُمكنكم إخباري المزيد عن التحوّل من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن الابتعاد عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونُقدّم هذا التحسين بنفس السعر.