مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0616S، Hpy166II

تمت إعادة صياغة Hpy166II باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10254983. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة HM، إنزيمات القطع المحددة الموفرة للوقت. التطبيقات: هضم إنزيم القطع. المواصفات: تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من pBR322 في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 100%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 50%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف: محلول التخزين المخفف C: 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 250 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 0.1 ملي مولار EDTA، 1 ملي مولار DTT، 0.15% تريتون X-100، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب. 50% جلسرين، درجة حموضة 7.4 عند 25 درجة مئوية، تعطيل حراري عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: محجوبة بسبب التداخل. الأسئلة الشائعة: س: هل إنزيم Hpy166II مؤهل لتوفير الوقت؟ ج: نعم. يقوم إنزيم Hpy166II بهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي الركيزة في 5 دقائق باستخدام 1 ميكرولتر من الإنزيم في ظل ظروف التفاعل الموصى بها. لمزيد من المعلومات، يرجى الرجوع إلى قسم الإنزيمات المؤهلة لتوفير الوقت. س: هل نشاط إنزيم Hpy166II حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع إنزيم Hpy166II قطع مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي تحتوي على مثيلة CpG متداخلة. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm وCpG Methylation أو REBASE. س: كم عدد أزواج القواعد التي يجب إضافتها في نهاية بادئ PCR بجوار موقع التعرف على Hpy166II لضمان قطع Hpy166II بشكل صحيح؟ ج: يُوصى بإضافة 6 أزواج من القواعد. س: هل يوجد لدى Hpy166II أي نيوشيزومرات متوفرة تجاريًا؟ ج: لا. للحصول على أحدث المعلومات حول النيوشيزومرات المتماثلة/النيوشيزومرات، يُرجى الرجوع إلى REBASE. س: هل يجب عليّ إعداد عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المؤهلة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يُمكنني إجراء عملية الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مُصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون تحلل الحمض النووي. س: اختبرتُ إنزيم القطع الخاص بكم على الحمض النووي الموصى به من قِبل شركة NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبَّط إنزيمات القطع النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محاليل NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات التركيز الملحي العالي)، بسبب وجود الملح في التفاعل. قد تُؤدي إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي إلى محاليل حمض نووي ذات مستويات عالية من الملح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبِّط نشاط الإنزيم. لتجنب ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. يُمكن تحقيق ذلك عن طريق تعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: هل يُمكنكم إخباري المزيد عن التحوّل من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونرى أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.