مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0624S، BspCNI

تمت إعادة صياغة BspCNI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10281541. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة B، تطبيقات إنزيمات القطع المحددة الموفرة للوقت: الاستنساخ السريع: سرّع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB. مواصفات هضم إنزيم القطع : تعريف الوحدة : وحدة واحدة من الإنزيم تقطع 1 بيكومول من الببتيد السكري O المعالج بالنيورامينيداز والموسوم بـ FAM في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 100%، NEBuffer™ r2.1: 75%، NEBuffer™ r3.1: 10%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف A، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 50 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 0.32 ملي مولار S-أدينوسيل ميثيونين (SAM) 50% جلسرين، درجة الحموضة 7.4 عند 25 درجة مئوية، تعطيل حراري عند 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. النشاط عند درجة حرارة 25 درجة مئوية: 100%. الأسئلة الشائعة : س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون تلف الحمض النووي. س: اختبرت إنزيم التقييد الخاص بكم على الحمض النووي الركيزة الموصى به من NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: جودة ونظافة الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. إنزيمات التقييد نشطة في محلول rCutSmart®، ولكن ليس في محلول rCutSmart®. قد يُثبَّط نشاط هذا الإنزيم، النشط في محلول NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات الملوحة العالية)، بفعل الأملاح الموجودة في التفاعل. قد تُنتج إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي محاليل حمض نووي تحتوي على مستويات عالية من الأملاح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبِّط نشاط الإنزيم. ولمنع ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا. هذا الإنزيم غير حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات. للحصول على معلومات مُحدَّثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يتطلب BspCNI وجود SAM للنشاط؟ ج: نعم، S-أدينوسيل ميثيونين (SAM) ضروري للنشاط الأمثل (يُزوَّد SAM في...). (تركيبة الإنزيم اعتبارًا من أكتوبر 2020). إذا لم تكن متأكدًا مما إذا كان SAM موجودًا في تركيبة الإنزيم، ولديك قارورة من SAM من NEB، فلا بأس من إضافة SAM إلى التفاعل وفقًا للإرشادات السابقة. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من BSA إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسعد NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المؤتلف (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل rAlbumin. نعتقد أن الابتعاد عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونحن قادرون على تقديم هذا التحسين بنفس السعر. س: هل بعض إنزيمات التقييد أكثر نشاطًا عند درجات حرارة أعلى هل درجات حرارة الحضانة أعلى من الموصى بها؟ ج: إنزيمات التقييد من NEB فعالة بنسبة 100% عند درجة حرارة الحضانة الموصى بها في المحلول المنظم الموصى به والمرفق مع كل إنزيم. مع بعض إنزيمات التقييد المعزولة من الكائنات المحبة للحرارة، قد تلاحظ زيادة في النشاط عند درجات حرارة حضانة أعلى. لا ننصح برفع درجة الحرارة لأن أنشطة نوكلياز إضافية قد تظهر عند درجات حرارة غير موصى بها.