مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0635L، BseYI

تمت إعادة صياغة BseYI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10227211. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة B. التطبيقات: هضم إنزيم القطع. المواصفات: تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يحتوي على: 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer : NEBuffer™ r1.1: 10%، NEBuffer™ r2.1: 50%، NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: 50%. توافق المخفف: محلول التخزين B: 10 ملي مولار Tris-HCl، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 5.4 عند 25 درجة مئوية. يُسخن. تعطيل الإنزيم عند 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: محجوبة بالتداخل. الأسئلة الشائعة : س: هل نشاط BseYI حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع BseYI قطع مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي تحتوي على مثيلة CpG متداخلة. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يرجى زيارة صفحة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: كم عدد أزواج القواعد التي يجب إضافتها في نهاية بادئ PCR المجاور لموقع تعرف BseYI لضمان قطع BseYI بشكل صحيح؟ ج: يوصى بإضافة 6 أزواج من القواعد. س: هل لدى BseYI أي نظائر متماثلة؟ ج: لا. للحصول على أحدث المعلومات حول النظائر المتماثلة/النظائر الجديدة، يرجى الرجوع إلى REBASE. س: عندما أقوم بتشغيل عينة الحمض النووي في هلام بعد هضمها باستخدام إنزيم BseYI، لا يبدو أن الحمض النووي يهاجر بشكل صحيح. هل هناك سبب لذلك؟ ج: نعم. قد يبقى إنزيم BseYI مرتبطًا بركيزة الحمض النووي بعد الهضم، مما يؤثر على معدل هجرة الحمض النووي أثناء الفصل الكهربائي. لتعطيل هذا الارتباط، يمكن إضافة SDS بتركيز نهائي 0.5% إلى محلول التحميل قبل تحميل العينة في الهلام. بدلاً من ذلك، يمكن تنقية الحمض النووي قبل الفصل الكهربائي. س: ما هي إنزيمات التقييد من NEB التي تأتي مع صبغة تحميل الهلام البنفسجية (6X)؟ ج: جميع إنزيمات التقييد HF ومعظم إنزيمات التقييد غير HF من NEB تأتي مع صبغة تحميل الهلام البنفسجية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل الصبغ، الأرجواني (6X) س: هل يمكنك معرفة ذلك هل يمكنك إخباري بالمزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري المصل (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1، وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1، وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.