مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0661S، MspJI

الفئات ذات الصلة: إنزيمات التقييد الحساسة للمثيلة والمعتمدة على المثيلة لعلم التخلق، إنزيمات التقييد لتحليل علم التخلق، إنزيمات التقييد الداخلية HM، التطبيقات: مواصفات هضم إنزيم التقييد، تعريف الوحدة: تُعرف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي pBR322 (dcm +) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول منظم rCutSmart™ بتركيز 1X، مضاف إليه محلول منشط الإنزيم بتركيز 1X. يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول منظم rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: <10%، NEBuffer™ r2.1: <10%، NEBuffer™ r3.1: <10%، محلول منظم rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين: 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 0.1 ملي مولار إيديتات ثنائي الصوديوم، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مصل البقر، 50% جلسرين. الرقم الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية، التثبيط الحراري عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة، حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. الأسئلة الشائعة : س: كيف استُخدم إنزيم MspJI في الدراسات فوق الجينية؟ ج: استُخدم هذا الإنزيم في التحليل فوق الجيني، حيث يقوم MspJI بقطع الحمض النووي المستهدف الذي يحتوي على مواقع CpG مثيلة في كلا الشريطين، مُنتجًا شظايا بطول 32 زوجًا قاعديًا تحتوي على مواقع CpG المثيلة. يمكن تسلسل هذه الشظايا المعزولة للكشف عن مواقع تعديل 5-mC (Cohen-Karni et al., (2011) PNAS 108: 11040-11045). س: كيف يُمكنني تقليل النشاط خارج الهدف أو النشاط النجمي؟ ج: قد ينتج النشاط النجمي، بما في ذلك هضم ركائز الحمض النووي غير المُمَثْيَلة، عن ظروف تفاعل غير مثالية مثل طول مدة الهضم، أو ارتفاع تركيز الإنزيم أو المُنشِّط، أو تركيز الجلسرين الذي يزيد عن 5%. قد يتطلب الأمر تحسين كمية الإنزيم اللازمة لتحقيق قطع نوعي فعال مع تجنب النشاط النجمي لكل ركيزة من الحمض النووي. س: هل يجب إضافة المزيد من MspJI للحصول على قطع أكبر؟ ج: لا، ليس بالضرورة. على عكس العديد من إنزيمات التقييد الشائعة، فإن استخدام كمية زائدة من MspJI يثبط عملية القطع. قد يتطلب الأمر تحسين كمية الإنزيم اللازمة للهضم الكامل لكل ركيزة من الحمض النووي. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا. هذا الإنزيم غير حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات. للحصول على معلومات محدثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري المصل (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر. س: هل يمكن تخزين صبغة تحميل الجل، البنفسجي 6X (B7024) في درجات حرارة منخفضة؟ ج: درجة حرارة التخزين الموصى بها لصبغة تحميل الجل، البنفسجي 6X، هي درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية). عادةً، قد يترسب محلول كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) عند تخزين الصبغة في درجات حرارة منخفضة. يمكن التخلص من هذا الراسب الطفيف بترك القارورة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة، أو بتسخينها برفق لمدة 10 دقائق. رجّ القارورة جيدًا عدة مرات قبل الاستخدام لإعادة المحلول إلى حالته المتجانسة.