مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0681T، Nb.BssSI

الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع الداخلية، إنزيمات التقييد الداخلية: لا يوجد تعريف للوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لتحويل 1 ميكروغرام من الحمض النووي pUC19 فائق الالتفاف إلى شكل دائري مفتوح في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يحتوي على: 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer : NEBuffer™ r1.1: 10%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: 25%. توافق المخفف: محلول التخزين B: 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 10 ملي مولار Tris-HCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مصل البقر، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري : لا. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. الأسئلة الشائعة : س: هل إنزيم Nb.BssSI نشط في درجات حرارة أعلى؟ ج: إنزيم Nb.BssSI نشط عند 50 درجة مئوية، ويُظهر نشاطًا أعلى بثلاثة أضعاف تقريبًا عند هذه الدرجة. س: كيف أوقف تفاعل القطع إذا تعذر تعطيل الإنزيم بالحرارة؟ ج: إذا لم تكن هناك حاجة لإجراء أي تعديلات أخرى على الحمض النووي المهضوم، فيمكن إيقاف التفاعل بإضافة محلول إيقاف. في شركة NEB، نستخدم محلول الإيقاف التالي: 50% جلسرين، 50 ملي مولار EDTA (الأس الهيدروجيني 8.0)، و0.05% أزرق بروموفينول (10 ميكرولتر / 50 ميكرولتر حجم التفاعل). يُعد استخلاص الفينول/الكلوروفورم وسيلة أخرى لتعطيل إنزيم التقييد. س: اختبرتُ إنزيم القطع الخاص بكم على الحمض النووي الموصى به من قِبل شركة NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبَّط إنزيمات القطع النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلول NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات التركيز الملحي العالي)، بسبب وجود الملح في التفاعل. قد تُؤدي إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي إلى محاليل حمض نووي ذات مستويات عالية من الملح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبِّط نشاط الإنزيم. لتجنب ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. يُمكن تحقيق ذلك عن طريق تعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: هل هناك أي إنزيمات قطع تُستخدم في نظام Irys® من شركة BioNano Genomics®؟ ج: إن Nb.BssSI وNt.BspQI عبارة عن إنزيمات نووية قاطعة تقطع شريطًا واحدًا فقط من الحمض النووي على ركيزة من الحمض النووي المزدوج. يمكن استخدامها لرسم خرائط الجينوم وتجميعه والكشف عن الاختلافات البنيوية على نظام Irys من BioNano Genomics. لمزيد من المعلومات، يرجى زيارة www.BioNanogenomics.com أو التواصل مع BioNano عبر البريد الإلكتروني: support@bionanogenomics.com. س: ما هو نشاط الإنزيمات القاطعة عند درجات حرارة مختلفة؟ ج: يمكن الاطلاع على نشاط إنزيمات NEB القاطعة عند درجات حرارة مختلفة في الجدول "تأثير درجات الحرارة المختلفة على الإنزيمات النووية القاطعة". س: هل يمكنني شراء كميات كبيرة من إنزيم موجود ضمن برنامج الابتكار؟ ج: نعم، إذا كنت بحاجة إلى كميات كبيرة من إنزيم ضمن برنامج الابتكار، فيرجى التواصل مع NEB عبر البريد الإلكتروني: EnzymesForInnovation@neb.com. يُرجى ملاحظة أن التوافر قد يكون محدودًا، وبالتالي قد تطول مدة التسليم للطلبات الكبيرة. قد يلزم إجراء اختبارات إضافية لمراقبة الجودة لتلبية احتياجاتك وتطبيقاتك المحددة. س: ما هي إنزيمات الابتكار؟ ج: إنزيمات الابتكار (EFI) هو مشروع أطلقته شركة NEB لتوفير إنزيمات فريدة للمجتمع العلمي، بهدف تمكين اكتشاف تطبيقات جديدة ومبتكرة. تتميز هذه الإنزيمات بخصائص فريدة وتخصصات مميزة غير متوفرة تجاريًا في أي مكان آخر، وبجودة NEB المعهودة. إنزيمات الابتكار هي إنزيمات انتقلت من تطبيقات غير معروفة أو استكشافية إلى أن أصبحت حجر الزاوية في تطبيق محدد. إذا كانت لديك فكرة عن "إنزيم للابتكار" مع تطبيق مقترح قد يكون مفيدًا، يُرجى مراسلتنا عبر البريد الإلكتروني على EnzymesForInnovation@neb.com. لمزيد من المعلومات، يُرجى مشاهدة الفيديو. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا، هذا الإنزيم غير حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm وCpG Methylation أو REBASE. س: هل يُمكنكم إخباري المزيد عن التحوّل من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن الابتعاد عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونُقدّم هذا التحسين بنفس السعر.