مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0704L، BccI

تمت إعادة صياغة BccI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10251906. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة B. التطبيقات: هضم إنزيم القطع. المواصفات: تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من حمض pXba DNA في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، مضاف إليه 2 ملي مول من ثنائي ثيوثريتول (DTT)، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مول من أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مول من أسيتات التريس، 10 ملي مول من أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل من الألبومين المؤتلف (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer ™: NEBuffer™ r1.1: 100%، NEBuffer™ r2.1: 50%، NEBuffer™ r3.1: 10%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف أ: محلول التخزين ، 50 ملي مول من أسيتات الصوديوم، 500 ملي مول من كلوريد الصوديوم، 0.1 ملي مول من ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الأسيتيك (EDTA)، 0.1 ملي مول من ثلاثي فوسفات ثلاثي الكالسيوم (TCEP)، 200 ميكروغرام/مل من الألبومين المؤتلف، 50%. الجلسرين عند درجة حموضة 6 ودرجة حرارة 25 درجة مئوية، التثبيط الحراري عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. الأسئلة الشائعة : س: هل نشاط BccI حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا. BccI غير حساس لمثيلة dam أو dcm أو CpG. للحصول على معلومات محدثة حول حساسية المثيلة، يرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: كم عدد أزواج القواعد التي يجب إضافتها في نهاية بادئ PCR بعد موقع تعرف BccI لضمان قطع BccI بشكل صحيح؟ ج: يوصى بإضافة 6 أزواج من القواعد. س: هل يوجد لـ BccI أي متصاوغات متماثلة/متصاوغات جديدة؟ ج: لا. للحصول على أحدث المعلومات حول المتماثلات/المتماثلات الجديدة، يُرجى الرجوع إلى REBASE. س: هل يُظهر إنزيم BccI نشاطًا غير طبيعي؟ ج: في ظل ظروف انخفاض القوة الأيونية، وارتفاع تركيز الإنزيم، وتركيز الجلسرين > 5%، ودرجة حموضة > 8.0، أو فترات حضانة طويلة، قد يُظهر إنزيم BccI نشاطًا غير طبيعي. س: اختبرتُ إنزيم التقييد الخاص بكم على الحمض النووي الركيزة الموصى به من قِبل NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبَّط إنزيمات التقييد النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلول NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات الملوحة العالية)، بسبب وجود الملح في التفاعل. قد تُؤدي إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي إلى محاليل حمض نووي تحتوي على مستويات عالية من الملح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبِّط نشاط الإنزيم. لتجنب ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل حجم التفاعل الإجمالي وفقًا لذلك. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري المصل (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المؤتلف (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المؤتلف. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.