مجموعة استخلاص الحمض النووي من الجل من شركة نيو إنجلاند بيولابس، T1120L، مونارك® سبين

الفئات ذات الصلة: استخلاص الحمض النووي من الجل، تطبيقات تنقية الأحماض النووية، الأسئلة الشائعة حول تنقية الأحماض النووية. س: هل يمكنني شراء أعمدة وأنابيب تجميع إضافية من Monarch® لمجموعة استخلاص الحمض النووي من الجل MonarchSpin (NEB #T1120) ومجموعة تنظيف الحمض النووي وتفاعل البوليميراز المتسلسل MonarchSpin (NEB #T1130) بشكل منفصل؟ ج: نعم، تُباع الأعمدة وأنابيب التجميع المتوافقة مع استخلاص الحمض النووي من الجل وتنظيف تفاعل البوليميراز المتسلسل (NEB #T2037L) بشكل منفصل أيضًا. س: هل يمكنني استخدام الماء لاستخلاص الحمض النووي عند استخدام مجموعات Monarch®؟ ج: نعم، يمكن استخدام الماء لاستخلاص الحمض النووي من أعمدة Monarch. وللحصول على أقصى كفاءة استخلاص، تأكد من خلو الماء من النيوكلياز. إذا كنت ستخزن الحمض النووي لفترة طويلة، نوصي باستخدام محلول Monarch Buffer EY المرفق (محلول استخلاص الحمض النووي)، والذي يحتوي على 0.1 ملي مول من EDTA. س: ما هو أصغر حجم لمحلول الإذابة الذي يمكن استخدامه مع أعمدة Monarch® Spin S1A (NEB #T2037)؟ ج: يتراوح الحجم الأمثل لمحلول الإذابة بين 5 و20 ميكرولتر. س: هل الأعمدة الموجودة في مجموعة Monarch® Spin PCR & DNA Cleanup Kit (5 ميكروغرام) (NEB #T1130) هي نفسها الموجودة في مجموعة Monarch Spin DNA Gel Extraction Kit (NEB #T1120)؟ ج: نعم، تستخدم كلتا المجموعتين نفس عمود الإذابة ذي الحجم المنخفض لضمان تنظيف وتركيز فعالين لعيناتك. كما تتوفر أعمدة Monarch Spin S1A والأنابيب للشراء بشكل منفصل (NEB # T2037L). س: ما هو تركيب كل محلول منظم مُرفق مع مجموعة Monarch® Spin DNA Gel Extraction Kit (NEB #T1120)؟ ج: تركيب المحاليل المنظمة خاص بالشركة. يمكننا، مع ذلك، مشاركة المعلومات التالية: محلول مونارك BY: محلول إذابة ثيوسيانات الغوانيدين، محلول مونارك WZ: محلول غسيل قائم على الإيثانول، محلول مونارك EY: محلول إزالة مكون من 10 ملي مولار تريس، 0.1 ملي مولار إيدتا، درجة حموضة 8.5. س: ما هي أقصى سعة ارتباط لأعمدة مونارك® سبين S1A المتوفرة في مجموعة استخلاص الحمض النووي من هلام مونارك سبين (NEB #T1120)؟ ج: يمكن للمادة الأساسية المرفقة في كل عمود أن ترتبط بما يصل إلى 5 ميكروغرام من الحمض النووي. قد يؤدي تنقية الحمض النووي من هلام الأغاروز إلى إدخال مكونات، مثل الكربوهيدرات، التي يمكن أن تتنافس على الارتباط بالمادة الأساسية وتؤثر على استخلاص الحمض النووي. س: هل يمكنني استئصال جزء من الهلام وتخزينه لتنقيته باستخدام مجموعة استخلاص الحمض النووي من هلام مونارك® سبين (NEB #T1120) في وقت لاحق؟ ج: نعم، يمكن تخزين الشريحة في أنبوب طرد مركزي صغير مغلق عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 3 أيام. مع ذلك، من المرجح أن يوفر التنقية مباشرةً بعد الاستئصال أفضل النتائج. س: ما هو حجم الحمض النووي الذي يمكن تنقيته باستخدام أعمدة Monarch® Spin Columns S1A (NEB #T2037)؟ ج: يمكن استخلاص الحمض النووي من 50 زوجًا قاعديًا إلى 25 كيلو قاعدة باستخدام أعمدة Monarch Spin Columns S1A، المتوفرة في كلٍ من مجموعة Monarch Spin DNA Gel Extraction Kit (NEB #T1120) ومجموعة Monarch Spin PCR & DNA Cleanup Kit (5 ميكروغرام) (NEB #T1130). تقل الكفاءة مع زيادة طول الحمض النووي نظرًا لارتباطه الوثيق بالمصفوفة. يمكن زيادة الاستخلاص مع الحمض النووي الأطول باستخدام طرق استخلاص معدلة، مثل استخدام محلول استخلاص ساخن (50 درجة مئوية) و/أو الحضانة في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق بعد إضافة محلول الاستخلاص. للاطلاع على التعليمات التفصيلية، يُرجى قراءة التعليمات الواردة في الدليل. س: بعد تنقية الحمض النووي باستخدام مجموعة استخلاص الحمض النووي من الهلام Monarch® Spin (NEB #T1120)، لاحظتُ وجود حزمة إضافية باهتة أسفل الحجم المتوقع على الهلام. ما سبب ذلك؟ ج: قد تُسبب العوامل المُذيبة المستخدمة في تنقية الحمض النووي باستخدام السيليكا تمسخ الحمض النووي، مما يؤدي إلى زيادة سرعة حركة هذه الأشكال أحادية السلسلة من الحمض النووي في الهلام. في حال وجودها، نوصي باستخدام الملح والحرارة لإعادة ربط السلاسل المتفككة. يُمكن إضافة كلوريد الصوديوم بتركيز 10 ملي مولار وتسخين العينة إلى 95 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة، ثم تبريدها ببطء إلى درجة حرارة الغرفة، مما يُعزز إعادة ربط السلاسل المتفككة. بدلاً من ذلك، إذا كانت العينة ستُستخدم في تفاعل إنزيمي، يُمكن إضافة الحمض النووي المُنقّى إلى التفاعل دون إضافة الإنزيم، ثم تسخينه إلى 95 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة، وتبريده إلى درجة حرارة التفاعل، ثم إضافة الإنزيم. س: هل أعمدة Monarch® Spin Columns S1A (NEB #T2037) متوافقة مع مشعبات التفريغ؟ ج: لقد اختبرنا توافق أعمدة Monarch من مجموعات Monarch التالية للاستخدام مع مشعبات التفريغ المكتبية الشائعة: مجموعة استخلاص الحمض النووي من الجل (NEB #T1020 و#T1120)، مجموعة تفاعل البوليميراز المتسلسل وتنظيف الحمض النووي (NEB #T1030 و#T1130)، مجموعات تنظيف الحمض النووي الريبي (NEB #T2030). يُرجى الرجوع إلى البروتوكولات الخاصة باستخدام مشعبات التفريغ الموضحة في الدليل. يمكن استخدام مشعبات التفريغ مع بعض أعمدة Monarch الأخرى، ولكن قد يتطلب ذلك تحسينًا و/أو وقتًا إضافيًا لتدفق السائل بالكامل. س: هل مكونات الإصدار السابق من مجموعة Monarch® DNA Gel Extraction Kit (NEB #T1020) متوافقة مع الإصدار الجديد؟ هل يمكنني استخدام محاليل #T1020 على أعمدة Monarch Spin Columns S1A الجديدة أو العكس؟ ج: نعم، على الرغم من أن هذا الإصدار الجديد من مجموعة استخلاص الحمض النووي من هلام مونارك سبين (NEB #T1120) مُطوّر بتحسينات في الأداء، إلا أن محاليل المجموعة من الإصدار السابق متوافقة. سيظل استخدام المجموعة مع محاليل مونارك الأخرى من الإصدارات السابقة يُنتج حمضًا نوويًا عالي الجودة ونقيًا مناسبًا لمختلف التطبيقات اللاحقة. مع ذلك، قد يكون هناك تباين يصل إلى 20% في الكمية المُستخلصة في بعض الحالات عند عدم استخدام المحاليل المتوافقة المُرفقة ضمن المجموعة. س: هل أعمدة مونارك سبين الجديدة والمُطوّرة (NEB #T2037) متوافقة مع نظام QIAcube®؟ ج: صُممت أعمدة مونارك سبين وأنابيب التجميع الجديدة لضمان تنقية عالية الجودة للأحماض النووية. تتميز بحجم إذابة منخفض، وعدم احتفاظها بالمحلول، وتقليل استخدام البلاستيك. مع ذلك، هذه الأعمدة الجديدة غير متوافقة مع نظام QIAcube. س: هل يُمكنني استخدام مجموعات تنظيف الحمض النووي الريبوزي من مونارك سبين لتنظيف تفاعل النسخ المختبري (IVT)؟ ج: نعم، مجموعة تنظيف الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مونارك سبين (50 ميكروغرام) (NEB #T2040) مناسبة لتنظيف تفاعلات النسخ المختبري التي لا يُتوقع أن يتجاوز ناتجها 50 ميكروغرام. إذا كان من المتوقع أن يتجاوز ناتج الحمض النووي الريبوزي (RNA) من عملية النسخ المختبري 50 ميكروغرام، فنوصي بتقسيم التفاعل على عدة أعمدة تنظيف الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مونارك سبين (50 ميكروغرام) أو تنظيفه باستخدام مجموعة تنظيف الحمض النووي الريبوزي (RNA) من مونارك سبين (500 ميكروغرام) (NEB #T2050)، نظرًا لقدرتها الأكبر على ربط الحمض النووي الريبوزي (RNA). س: ألاحظ وجود بعض بقايا السيليكا في عمود مونارك. هل هذه مشكلة؟ ج: لا، هذه ليست مشكلة. إن وجود بعض بقايا السيليكا أو جزيئاتها في عمود تنقية الحمض النووي لا يؤثر على ربط الحمض النووي أو نقائه. صُممت أعمدتنا للاحتفاظ بألياف السيليكا، مما يساعد على ضمان عدم وصولها إلى المستخلص النهائي. س: هل يمكنني استخدام مجموعة استخلاص الحمض النووي من الجل Monarch Spin (NEB #T1120) لكميات قليلة من الحمض النووي؟ ج: نعم. يمكن استخدام مجموعة استخلاص الحمض النووي من الجل Monarch Spin (NEB #T1120) مع كميات قليلة من الحمض النووي تصل إلى 10 نانوغرام. يتوفر بروتوكول مُحسَّن لاستخلاص الحمض النووي بكميات قليلة في قسم البروتوكولات. هذه الطريقة فعالة لكميات الحمض النووي التي تتراوح من 10 نانوغرام إلى 500 نانوغرام.