نيو إنجلاند بيولابس، T1135L، مجموعة تنظيف الحمض النووي عالية السعة من مونارك® سبين (100 ميكروغرام)

الفئات ذات الصلة: تفاعل البوليميراز المتسلسل وتنظيف الحمض النووي، تطبيقات تنقية الأحماض النووية، مواصفات تنقية الأحماض النووية ، المواد المطلوبة (غير متوفرة ): إيزوبروبانول، إيثانول. الأسئلة الشائعة : س: هل يمكنني شراء أعمدة Monarch® وأنابيب التجميع الإضافية لمجموعة Monarch Spin عالية السعة لتنقية الحمض النووي (100 ميكروغرام) (NEB #T1135) بشكل منفصل؟ ج: نعم، تُباع الأعمدة (NEB #T1157) وأنابيب التجميع (NEB #T2118) لمجموعة Monarch Spin عالية السعة لتنقية الحمض النووي بشكل منفصل أيضًا. س: هل يمكنني استخدام الماء لاستخلاص الحمض النووي عند استخدام مجموعات Monarch®؟ ج: نعم، يمكن استخدام الماء لاستخلاص الحمض النووي من أعمدة Monarch. وللحصول على أقصى كفاءة استخلاص، تأكد من خلو الماء من النيوكلياز. إذا كنت ستخزن الحمض النووي لفترة طويلة، نوصي باستخدام محلول Monarch Buffer EY المرفق (محلول استخلاص الحمض النووي)، والذي يحتوي على 0.1 ملي مول من EDTA. س: ما هو أصغر حجم لمحلول الإذابة الذي يمكن استخدامه مع أعمدة Monarch® Spin Columns S3A (NEB #T1157)؟ ج: يتراوح حجم الإذابة المناسب عند استخدام أعمدة Monarch Spin Columns S3A مع مجموعة Monarch Spin High-Capacity DNA Cleanup Kit (100 ميكروغرام) بين 50 و200 ميكرولتر، مع التوصية باستخدام 100 ميكرولتر. عند استخدام أقل حجم للإذابة، يُنصح بالحضانة في درجة حرارة الغرفة لبضع دقائق إضافية لزيادة كمية الحمض النووي المستخلص. س: ما هو تركيب كل محلول من المحاليل المرفقة مع مجموعة Monarch® Spin High-Capacity DNA Cleanup Kit (100 ميكروغرام) (NEB #T1135)؟ ج: تركيب المحاليل خاص بالشركة. مع ذلك، يمكننا مشاركة المعلومات التالية: محلول مونارك BZ: محلول ربط قائم على الغوانيدين والإيزوبروبانول. محلول مونارك WZ: محلول غسيل قائم على الإيثانول. محلول مونارك EY: محلول إزالة مكون من 10 ملي مولار من التريس، و0.1 ملي مولار من الإيثيلين ثنائي الأمين رباعي حمض الأسيتيك، ودرجة حموضة 8.5. س: ما هي أقصى سعة ربط لأعمدة مونارك® سبين S3A المرفقة مع مجموعة مونارك سبين عالية السعة لتنقية الحمض النووي (100 ميكروغرام) (NEB #T1135)؟ ج: يمكن للمادة الأساسية المرفقة في كل عمود ربط ما يصل إلى 100 ميكروغرام من الحمض النووي. يؤدي تنقية الحمض النووي من تفاعل البلمرة المتسلسل أو أي تفاعل إنزيمي آخر إلى إدخال مكونات مثل المنظفات والأصباغ والبروتينات والنيوكليوتيدات، والتي يمكن أن تتنافس جميعها على الارتباط بالغشاء وتؤثر على استخلاص الحمض النووي. س: ما العوامل التي تؤثر على نسبة الامتصاص عند 260/230 نانومتر عند استخدام مجموعة تنقية الحمض النووي عالية السعة Monarch® Spin (NEB #T1135)؟ ج: يمكن أن يقلل كل من الغوانيدين والإيثانول، اللذان يُضافان أثناء التحضير، من نسبة الامتصاص عند 260/230 نانومتر. اتباع البروتوكول يضمن إزالة هذين المكونين. بالإضافة إلى ذلك، وعلى الرغم من ندرة حدوث ذلك، قد تخرج بعض الجسيمات التي يمكن أن تؤثر على النسبة أيضًا. في هذه الحالة، يُنصح بإجراء عملية تدوير إضافية لمدة 15 ثانية للحمض النووي المُستخلص قبل تقييمه باستخدام مطياف (Nanodrop®). كما يُنصح بسحب عينة الحمض النووي من أعلى العينة لتجنب نقل أي جسيمات. س: هل لديكم أي توصيات لتنقية الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) عند استخدام مجموعة تنقية الحمض النووي عالية السعة Monarch® Spin (NEB #T1135)؟ ج: يمكن استخدام مجموعة تنقية الحمض النووي عالية السعة من مونارك سبين (100 ميكروغرام) لتنقية الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA). يرتبط الحمض النووي أحادي السلسلة بقوة أقل من الحمض النووي ثنائي السلسلة (dsDNA)، وتتأثر قوة الارتباط بالطول والتسلسل وتكوين أي بنية ثانوية. بالنسبة للحمض النووي أحادي السلسلة الذي يقل طوله عن 100 نيوكليوتيد، نوصي باستخدام بروتوكول تنقية الأوليغونوكليوتيدات المرفق مع المجموعة، وهو مُحسَّن لاستخلاص الحمض النووي الأقصر. على الرغم من أن مجموعة تنقية الحمض النووي وتفاعل البوليميراز المتسلسل من مونارك سبين (100 ميكروغرام) تعمل بشكل جيد مع الحمض النووي أحادي السلسلة، إلا أنه من الصعب التنبؤ بكفاءة استخلاصه. لذلك، نوصي بإجراء تجربة استخلاص باستخدام الحمض النووي المطلوب قبل استخدام العينة كاملة. س: ما هو حجم الحمض النووي الذي يمكن تنقيته باستخدام مجموعة تنقية الحمض النووي عالية السعة من مونارك سبين (NEB #T1135)؟ ج: يمكن استخلاص الحمض النووي من 50 زوجًا قاعديًا إلى 25 كيلوبايت باستخدام مجموعة تنظيف الحمض النووي عالية السعة من مونارك سبين (100 ميكروغرام) (NEB #T1135). تقل الكفاءة مع زيادة طول الحمض النووي نظرًا لارتباطه الوثيق بالمصفوفة. يمكن تحسين استخلاص الحمض النووي الذي يبلغ طوله 15 كيلوبايت أو أكثر بتعديل طريقة الإذابة، باستخدام محلول إذابة ساخن (50 درجة مئوية) وتمديد فترات الحضانة. للحصول على أفضل استخلاص لقطع الحمض النووي الكبيرة، يُرجى اتباع التعليمات الواردة في الدليل. بالنسبة للحمض النووي الذي يزيد طوله عن 25 كيلوبايت، نوفر بروتوكولًا مُعدَّلًا ومُحسَّنًا للحمض النووي الكبير على صفحتنا الإلكترونية. يُرجى الرجوع إلى البروتوكول المتاح على الصفحة الإلكترونية للحصول على إرشادات إجرائية مفصلة. س: هل أعمدة مونارك سبين S3A (NEB #T1157) متوافقة مع مشعبات التفريغ؟ ج: نعم، أعمدة مونارك سبين S3A متوافقة مع مشعبات التفريغ. يُرجى الرجوع إلى البروتوكولات الخاصة باستخدام مشعبات التفريغ المتوفرة في الدليل. يمكن استخدام مشعبات التفريغ مع بعض أعمدة مونارك الأخرى، ولكن قد يتطلب ذلك تحسينًا و/أو وقتًا إضافيًا لتدفق السائل بالكامل. س: هل يمكنني استخدام مجموعة مونارك® سبين عالية السعة لتنقية الحمض النووي (NEB #T1135) لتنقية قليل النوكليوتيدات وشظايا الحمض النووي الأخرى؟ ج: نعم. يُحسّن تعديل بسيط في البروتوكول، بإضافة الإيثانول إلى العينة قبل الارتباط، كفاءة ارتباط الحمض النووي الصغير بالمصفوفة، مما يسمح لقليل النوكليوتيدات والحمض النووي ثنائي السلسلة القصير بالارتباط بالعمود. يُرجى الرجوع إلى بروتوكول تنقية قليل النوكليوتيدات. س: هل يمكنني استخدام مجموعة مونارك® سبين عالية السعة لتنقية الحمض النووي (NEB #T1135) لتنقية الحمض النووي الدائري؟ ج: نعم، يمكنك استخدام مجموعة مونارك سبين عالية السعة لتنقية الحمض النووي (NEB #T1135) لتنقية الحمض النووي الدائري، بما في ذلك الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) وثنائي السلسلة (dsDNA)، باتباع بروتوكول تنقية الحمض النووي القياسي. س: هل يمكنني استخدام مجموعة تنقية الحمض النووي عالية السعة Monarch® Spin (NEB #T1135) لتنقية الحمض النووي الذي يزيد حجمه عن 25 كيلوبايت أو الحمض النووي الجينومي؟ ج: نعم، يمكنك استخدام مجموعة تنقية الحمض النووي عالية السعة Monarch Spin (NEB #T1135) لتنقية الحمض النووي الكبير، بما في ذلك الحمض النووي الجينومي أو ناتج تضخيم الدائرة المتدحرجة (RCA)، باتباع البروتوكول المُعدَّل المُرفق. يُرجى الرجوع إلى البروتوكول المُناسب على صفحتنا الإلكترونية للاطلاع على التعليمات التفصيلية. س: هل أعمدة Monarch® Spin S3A (NEB #T1157) متوافقة مع نظام QIAcube®؟ ج: صُممت أعمدة Monarch الجديدة وأنابيب التجميع لضمان تنقية عالية الجودة للأحماض النووية. تتميز بحجم إخراج منخفض، وعدم احتفاظها بالمحلول المنظم، وتقليل استخدام البلاستيك. مع ذلك، فإن هذه الأعمدة الجديدة غير متوافقة مع نظام QIAcube. س: ألاحظ وجود بعض بقايا السيليكا في عمود Monarch الخاص بي. هل يُعد هذا مشكلة؟ ج: لا، هذه ليست مشكلة. وجود بعض بقايا السيليكا أو جزيئاتها في عمود تنقية الأحماض النووية لا يؤثر على ارتباط الأحماض النووية أو نقائها. صُممت أعمدتنا لاحتجاز ألياف السيليكا، مما يضمن عدم وصولها إلى المستخلص النهائي.