نيو إنجلاند بيولابس، T3051L، محلول تحلل خلايا الدم الحمراء مونارك©

الفئات ذات الصلة: استخلاص الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي، تنقية الأحماض النووية. الأسئلة الشائعة : س: هل يمكن استخدام مجموعات استخلاص الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي من مونارك لمعالجة طبقة الكريات البيضاء البشرية؟ ج: نعم، يمكن استخدام مجموعة استخلاص الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي من مونارك للخلايا والدم (NEB #T3050) لمعالجة طبقة الكريات البيضاء. عند العمل مع طبقة الكريات البيضاء، وهي محلول مركز من الخلايا الليمفاوية أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMC)، يجب استخدام كميات أقل من تلك المستخدمة عند العمل مع الدم. يجب ألا يتجاوز إجمالي عدد الخلايا 1 × 10⁷ خلية للبروتوكول القياسي (التحريك بسرعة 2000 دورة في الدقيقة)، ولا يتجاوز 5 × 10⁶ خلية عند الحاجة إلى الحمض النووي فائق الوزن الجزيئي (تحريك خفيف). تحتوي طبقة الكريات البيضاء، كما يتم الحصول عليها من بنوك الدم، على ما يصل إلى 1 × 10⁹ خلية ليمفاوية أحادية النواة في الدم المحيطي لكل 30-80 مل، وهو ما يعادل تقريبًا 1 × 10⁷ - 3 × 10⁷ خلية/مل. نقترح البدء بـ 100-300 ميكرولتر من هذا المحلول، ثم إضافة محلول الفوسفات الملحي (PBS) حتى يصل الحجم الإجمالي إلى 500 ميكرولتر، والانتقال إلى إجراء تحليل كريات الدم الحمراء كما لو كانت عينة دم بحجم 500 ميكرولتر. س: عينة دمي مجمدة في أجزاء أكبر من الموصى بها في بروتوكولكم (مثلًا، في أنابيب فاكوتينر). هل يمكنني استخدام بروتوكول الدم المجمد مع مجموعة استخلاص الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي من مونارك للخلايا والدم (NEB #T3050)؟ ج: نعم، ولكن من المهم عدم إذابة العينة تمامًا (أو تسخينها) عندما لا تكون في وجود محلول تحليل كريات الدم الحمراء، لأن تسخين العينة سيؤدي إلى تنشيط النيوكليازات بسرعة. ضع أنبوب الدم في درجة حرارة الغرفة حتى يبدأ بالذوبان (سيصبح لونه أحمر داكنًا). ضع الأنبوب في جهاز تدوير الأنابيب مضبوطًا على 20 دورة في الدقيقة، وقم بتدويره حتى تذوب العينة تمامًا تقريبًا. احرص على مراقبة العينة على جهاز الدوران بعناية فائقة لتحديد اللحظة التي تقترب فيها من الذوبان. عندئذٍ، قم برجّها لفترة وجيزة لإتمام عملية الذوبان وإذابة أي تكتلات، ثم ضعها بسرعة على الثلج. خذ جزءًا من الدم لتحضيره (يوصى أن يكون حجم البداية 500 ميكرولتر) وضعه في أنبوب سعة 2 مل. أضف 3 أحجام من محلول تحلل كريات الدم الحمراء البارد، واخلطه بالتقليب 5 مرات، ثم تابع بروتوكول الدم المجمد (الخطوة 5). لا يجب إعادة تجميد عينات الدم المذابة. بدلاً من ذلك، يمكنك إذابة عينة الدم قليلاً في حمام مائي عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، بما يكفي فقط لفصلها عن الوعاء ونقلها إلى وعاء أكبر يتسع لإضافة 3 أحجام من محلول تحلل كريات الدم الحمراء البارد. بعد ذلك، يمكن إذابة العينة في وجود محلول تحلل كريات الدم الحمراء وفقًا للبروتوكول. يرجى ملاحظة أن هذا النهج قد يتطلب إضافة محلول تحلل خلايا الدم الحمراء (NEB #T3051L).