نيو إنجلاند بيولابس، T3056L، محلول استخلاص الحمض النووي الجينومي مونارك® II

الفئات ذات الصلة: استخلاص الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي، استخلاص وتنقية الحمض النووي الجينومي، تنقية الأحماض النووية. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نظام القياس الأنسب لتقييم تركيز الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي؟ ج: بحسب خبرتنا، وخلافًا للاعتقاد السائد، فإن قياس تركيز الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي باستخدام جهاز Qubit® ليس الطريقة الأكثر دقة. توفر قياسات الامتصاص الضوئي قيم تركيز أكثر دقة، ولكن نظرًا للزوجة العالية لعينات الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي، يلزم إجراء عدة تكرارات. عادةً ما تقلل قراءات Qubit من تقدير كمية الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي؛ فبالنسبة للحمض النووي الجينومي المعزول باستخدام أعمدة السيليكا الدوارة (عادةً 20-80 كيلوبايت)، يوفر Qubit قراءات تركيز الحمض النووي أقل بنسبة 10-15% من تلك التي يتم الحصول عليها بواسطة مطياف ضوئي. تقل قدرة الصبغة المتداخلة على تلوين الحمض النووي مع زيادة طول قطعة الحمض النووي، مما يؤدي إلى فرق أكبر بين قيم Qubit وقيم الامتصاص الضوئي عند العمل مع الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي. قد تصل الاختلافات إلى 35%، أو حتى أعلى في بعض الحالات، مما يؤدي إلى تقليل كبير في تقدير تركيز الحمض النووي. س: أواجه صعوبة في إذابة الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي بعد عزله. هل لديكم أي نصائح لزيادة الذوبان؟ ج: من المعروف أن الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي (HMW DNA) يصعب إذابته. عندما تكون عينات الحمض النووي عالية التركيز أو تحتوي على حمض نووي فائق الوزن الجزيئي، يصبح إذابته أكثر صعوبة. بشكل عام، كلما زاد انضغاط الحمض النووي، زادت صعوبة إذابته. توفر حبيبات الزجاج المستخدمة في مجموعات استخلاص الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي من مونارك سطحًا كبيرًا يلتف حوله الحمض النووي، مما يحافظ عليه عادةً في شكل مفتوح، ويسهل إذابته. ومع ذلك، قد تظل الذوبان مشكلة. فيما يلي بعض النصائح لزيادة ذوبان الحمض النووي عند استخدام مجموعات استخلاص الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي من مونارك: حاول تقليل مدة ارتباط الحمض النووي بالحبيبات دون وجود سائل. بعد إزالة السائل من الحبيبات، أضف المحلول المنظم التالي فورًا. كلما طالت مدة تجفيف الحمض النووي على الخرز، زادت كثافته وصعوبة إذابته لاحقًا. عند ربط الحمض النووي بالخرز، لا تقلب العينة لفترة أطول من الموصى بها. فكلما طالت مدة التفاف الحمض النووي حول الخرز، زادت كثافته وصعوبة إذابته لاحقًا. راجع دليل الاستخدام الخاص بنا، "تجانس عينات الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي (HMW DNA) بعد الإذابة"، لمزيد من النصائح حول تجانس الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي بعد الإذابة.