بروميج، GA1082، فحص حيوي لعامل نمو بطانة الأوعية الدموية

فحص حيوي أبسط وأكثر اتساقًا لعامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF)
مؤهل مسبقًا وفقًا لإرشادات ICH
فحص قائم على آلية العمل
لا حاجة لزراعة الخلايا الأولية
متوفر بتنسيق سهل الاستخدام بعد إذابته؛ كما يتوفر بتنسيق نموذج تكاثر الخلايا (CPM).
تحديد:
خلايا HEK293 GA109A KDR/NFAT-RE، عبوة واحدة × 0.5 مل
مصل جنيني بقري J121A، عبوة واحدة × 4 مل
وسط DMEM مع 4.5 غ/ل من الجلوكوز، إل-جلوتامين، بيروفات الصوديوم J236A 1 × 60 مل
محلول اختبار لوسيفيراز Bio-Glo™ G719A، عبوة واحدة × 10 مل
ركيزة اختبار لوسيفيراز Bio-Glo™ G720A، عبوة واحدة
خلايا HEK293 KDR/NFAT-RE GA109A، 5 × 0.5 مل
مصل جنيني بقري J121A 5 × 4 مل
وسط DMEM مع 4.5 غ/ل من الجلوكوز، إل-جلوتامين، بيروفات الصوديوم J236A 5 × 60 مل
محلول اختبار لوسيفيراز Bio-Glo™ G719A، 5 × 10 مل
ركيزة اختبار لوسيفيراز Bio-Glo™ G720A، 5 × قارورة واحدة
خلايا HEK293 KDR/NFAT-RE (CPM) GA108A 2 × 1 مل
VEGF J237A المؤتلف 1 × 10 ميكروغرام
يُعد عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF) بروتينًا إشاريًا هامًا يُفرز من الخلايا الظهارية والخلايا السرطانية والبلعميات. وله وظائف عديدة، منها تحفيز تكوين الأوعية الدموية، وزيادة نفاذية الأوعية، وتعزيز غزو الورم وبقائه، وتثبيط الاستجابة المضادة للأورام في الخلايا التائية التنظيمية (Treg). توجد عدة أنواع فرعية من مستقبلات VEGF، هي: VEGFR1 وVEGFR2 وVEGFR3. ويُعدّ VEGFR2 (المعروف أيضًا باسم KDR) مسؤولًا عن معظم الاستجابات الخلوية المعروفة لمستقبلات VEGF. يوجد VEGF في أربعة أشكال متماثلة، هي: VEGF-121 وVEGF-165 وVEGF-189 وVEGF-206، حيث يُعدّ كل من VEGF-121 وVEGF-165 شكلين قابلين للانتشار. ويُعدّ VEGF-165 الشكل المتماثل السائد في الجسم.
تحفز جميع أفراد عائلة VEGF الاستجابة الخلوية عن طريق الارتباط بمستقبلات التيروزين كيناز، وتحديدًا VEGFR-1 (Flt-1) وVEGFR-2 (Flk-1/KDR). عند ارتباط VEGF بـ KDR، يتحد المستقبل وينشط عبر عملية الفسفرة المتبادلة.
يُعدّ اختبار VEGF الحيوي اختبارًا خلويًا يعتمد على التألق البيولوجي، ويقيس تحفيز VEGF وتثبيط KDR (VEGFR-2) باستخدام إنزيم لوسيفيراز كمؤشر. يتغلب هذا الاختبار على العديد من قيود اختبارات تكاثر الخلايا البطانية الحالية، ويمكن استخدامه لاكتشاف وتطوير علاجات بيولوجية جديدة تهدف إما إلى تحفيز استجابة VEGF أو تثبيطها.
تم تصميم الخلايا المستجيبة لعامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF) للتعبير عن عنصر الاستجابة (RE) في الجزء العلوي من
luc2P
بالإضافة إلى مستقبل VEGF الخارجي. عندما يرتبط VEGF بالخلايا المستجيبة له، ينقل المستقبل إشارات داخلية ينتج عنها توهج ضوئي. يتم الكشف عن الإشارة المتوهجة بيولوجيًا وقياسها كميًا باستخدام نظام Bio-Glo™ Luciferase Assay System (رقم المنتج: G7940) وجهاز قياس توهج قياسي مثل نظام GloMax® Discover System (رقم المنتج: GM3000).
يمكن استخدام عامل نمو بطانة الأوعية الدموية المُعاد تركيبه كربيطة تحكم إيجابية في اختبار VEGF الحيوي (رقم المنتج: GA2001، GA2005). يبلغ الوزن الجزيئي المتوقع لبروتين VEGF-165 البشري، المكون من الأحماض الأمينية ألانين 27 إلى أرجينين 191 (رقم التسجيل: AAM03108)، 19 كيلو دالتون، ويُقدم في محلول من حمض الستريك بتركيز 5 ملي مولار، وفوسفات الصوديوم ثنائي الهيدروجين بتركيز 5 ملي مولار.
4
، 0.15M NaCl (pH 4.0) وبتركيز 200 ميكروغرام/مل.