بروميج، N2931، نانوبريت® TE فحوصات إنزيم E3 ليغاز داخل الخلايا

قياس ارتباط إنزيم E3 ليغاز بالهدف وتوافر المركب داخل الخلايا
تحديد كمية الألفة داخل الخلايا للمركبات تجاه إنزيمات يوبيكويتين ليغاز CRBN أو VHL E3 في الخلايا الحية
نفّذ سير عمل بسيط لحساب التوافر داخل الخلايا للمركب، وهو مقياس للنفاذية، للمساعدة في تحديد أولويات المركبات
فحوصات قابلة للتطوير باستخدام بروتوكولات الإضافة فقط
تحديد:
NanoBRET® Nano-Glo® الركيزة N157A 1 × 50μl
محلول تخفيف التتبع N219A 1 × 5 مل
مثبط نانولوك® خارج الخلية N235A 1 × 17 ميكرولتر
NanoLuc®-CRBN Fusion Vector N274A 1 × 20 ميكروجرام
ناقل التعبير DDB1 N276A 1 × 20 ميكروغرام
NanoBRET® TE Tracer CRBN N290A 1 × 30μl
NanoBRET® Nano-Glo® الركيزة N157C 1 × 330μl
محلول تخفيف التتبع N219A 1 × 5 مل
مثبط نانولوك® خارج الخلية N235B، 1 × 110 ميكرولتر
NanoLuc®-CRBN Fusion Vector N274A 1 × 20 ميكروجرام
ناقل التعبير DDB1 N276A 3 × 20 ميكروغرام
NanoBRET® TE Tracer CRBN N290B 1 × 300 ميكرولتر
NanoBRET® Nano-Glo® الركيزة N157D 1 × 3.3 مل
محلول تخفيف التتبع N219B 1 × 50 مل
مثبط نانولوك® خارج الخلية N235C، عبوة واحدة × 1.1 مل
NanoBRET® TE Tracer CRBN N290B 10 × 300 ميكرولتر
حامل الحمض النووي E488A للتحويل الجيني 1 × 20 ميكروغرام
NanoBRET® Nano-Glo® الركيزة N157A 1 × 50μl
محلول تخفيف التتبع N219A 1 × 5 مل
مثبط نانولوك® خارج الخلية N235A 1 × 17 ميكرولتر
ناقل الاندماج VHL-NanoLuc® N275A 1 × 20 ميكروغرام
NanoBRET® TE Tracer VHL N292A 1 × 30 ميكرولتر
حامل الحمض النووي E488B للتحويل الجيني 1 × 100 ميكروغرام
NanoBRET® Nano-Glo® الركيزة N157C 1 × 330μl
محلول تخفيف التتبع N219A 1 × 5 مل
مثبط نانولوك® خارج الخلية N235B، 1 × 110 ميكرولتر
ناقل الاندماج VHL-NanoLuc® N275A 1 × 20 ميكروغرام
NanoBRET® TE Tracer VHL N292B 1 × 300 ميكرولتر
NanoBRET® Nano-Glo® الركيزة N157D 1 × 3.3 مل
محلول تخفيف التتبع N219B 1 × 50 مل
مثبط نانولوك® خارج الخلية N235C، عبوة واحدة × 1.1 مل
NanoBRET® TE Tracer VHL N292B 10 × 300 ميكرولتر
تخضع عملية تحلل البروتين بواسطة جزيئات صغيرة مثل بروتاكس أو المواد اللاصقة الجزيئية لعدة خطوات.
تتضمن الخطوات الأولية دخول مركب التحلل الجزيئي الصغير إلى الخلية، متبوعًا بالارتباط بـ E3
يوبيكويتين ليجاز والبروتين المستهدف. تعمل فحوصات NanoBRET® TE داخل الخلايا E3 Ligase على قياس كمية كل من الخلايا داخل الخلايا
استهداف الهدف وتوافر المركب المحلل داخل الخلايا.
تعتمد هذه التحليلات على تقنية NanoBRET®، وهي تقنية لنقل الطاقة مصممة لقياس الجزيئات
التقارب في الخلايا الحية. S
وبشكل خاص، NanoBRET®
تسمح فحوصات ارتباط الهدف (TE) داخل الخلايا E3 Ligase بقياس تقارب مركب التحلل مع بروتين E3 ubiquitin ligase، أو Cereblon (CRBN) أو مثبط الورم لمرض فون هيبل لينداو (VHL) في الخلايا الحية.
أنا
بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام هذه الاختبارات لتحديد كمية التوافر داخل الخلايا لمركب ما.
نظراً لأن المُحللات غير المتجانسة ثنائية الوظيفة مثل PROTACs غالباً ما يكون لها وزن جزيئي عالٍ، فقد تعاني من ضعف في أداء الخلايا
النفاذية أو التوافر داخل الخلايا. من خلال إجراء عملية بسيطة تتضمن نمطين فريدين للفحص (الخلايا الحية والخلايا المنفذة)، NanoBRET®
يمكن استخدام فحوصات TE E3 Ligase لحساب التوافر داخل الخلايا لمركب التحلل.