أنظمة انتقائية CDK لاستهداف الأهداف من بروميج، NP5150، NanoBRET®

تحديد انتقائية المركب لكينازات السيكلين المعتمدة (CDKs) في الخلايا الحية
تحديد ألفة المركب أو المثبط ونسبة ارتباطه بما يصل إلى 16 من إنزيمات CDK
يستخدم كل نظام NanoBRET® TE CDK Selectivity System سير عمل بسيطًا يعتمد على الإضافة فقط في الألواح الدقيقة، ويوفر لوحة ناقل CDK (A أو B) واختبار NanoBRET® TE Kinase.
لوحتان ناقلتان جاهزتان للنقل الجيني NanoBRET® TE CDK (أ و ب) مع 8 أزواج فردية من ناقل الاندماج CDK-NanoLuc® مع الحمض النووي الحامل/السيكلين
تحديد:
مزيج ناقل CDK1/CCNB1 NP501A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK2/CCNE1 NP502A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK3/CCNE1 NP503A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK4/CCND3 NP504A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK5/CDK5R1 NP505A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK6/CCDN1 NP506A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK7/الناقل NP507A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK9/CCNK NP508A 1 × 120 ميكرولتر
حامل الحمض النووي E488B للتحويل الجيني 1 × 100 ميكروغرام
NanoBRET® Nano-Glo® الركيزة N157C 1 × 330μl
محلول تخفيف التتبع N219A 1 × 5 مل
مثبط نانولوك® خارج الخلية N235B، 1 × 110 ميكرولتر
NanoBRET® Tracer K-10 N264B 1 × 300 ميكرولتر
LIMK1-NanoLuc® Fusion Vector NV339A 1 × 20 ميكروغرام
مزيج ناقل CDK1/CCNB1 NP501A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK2/CCNE1 NP502A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK3/CCNE1 NP503A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK4/CCND3 NP504A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK5/CDK5R1 NP505A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK6/CCDN1 NP506A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK7/الناقل NP507A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK9/CCNK NP508A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK10/CCNL2 NP511A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK14/CCNY NP512A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK15/CCNY NP513A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK16/CCNY NP514A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK17/CCNY NP515A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK18/CCNY NP516A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDKL2/الناقل NP517A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK20/CCNH NP518A 1 × 120 ميكرولتر
حامل الحمض النووي E488B للتحويل الجيني 1 × 100 ميكروغرام
NanoBRET® Nano-Glo® الركيزة N157C 1 × 330μl
محلول تخفيف التتبع N219A 1 × 5 مل
مثبط نانولوك® خارج الخلية N235B، 1 × 110 ميكرولتر
NanoBRET® Tracer K-10 N264B 1 × 300 ميكرولتر
LIMK1-NanoLuc® Fusion Vector NV339A 1 × 20 ميكروغرام
مزيج ناقل CDK10/CCNL2 NP511A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK14/CCNY NP512A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK15/CCNY NP513A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK16/CCNY NP514A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK17/CCNY NP515A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK18/CCNY NP516A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDKL2/الناقل NP517A 1 × 120 ميكرولتر
مزيج ناقل CDK20/CCNH NP518A 1 × 120 ميكرولتر
تقيس أنظمة NanoBRET® Target Engagement (TE) CDK Selectivity Systems كميًا ألفة المركبات داخل الخلايا وشغلها مقابل مجموعتين من 8 CDKs لكل منهما، مما يسمح لك بقياس ما يصل إلى 16 CDK في تجربة واحدة. تحتوي كل مجموعة ناقل على 8 أنابيب فردية من نواقل CDK-NanoLuc® المدمجة، والتي يتم مزجها مسبقًا إما مع ناقل تعبير السيكلين أو الحمض النووي الحامل لتحقيق أفضل عمليات النقل الجيني.
تعتمد أنظمة الانتقائية CDK على
تقنية NanoBRET® TE
تعتمد هذه التقنية على طريقة نقل طاقة الرنين البيولوجي (BRET) التي تستخدم جزيء لوسيفيراز NanoLuc® الصغير شديد السطوع كمصدر للطاقة، ومتتبع NanoBRET® TE القابل للنفاذ الخلوي كمستقبل لها. وتستخدم أنظمة انتقائية CDK لوحة متعددة الآبار تعتمد على الإضافة فقط، مع اختبار واحد لكيناز NanoBRET® TE.
في هذه الدراسة، استُخدمت طريقة NanoBRET® TE لتحليل مجموعة من 46 مثبطًا لـ CDK وجزيئات تجريبية متقدمة سريريًا في الخلايا الحية. أكدت النتائج ارتباط المركبات السريرية المتقدمة وكشفت عن تفاعلات جديدة بين الدواء وCDK. توفر هذه النتائج الجديدة إمكانية إعادة توظيف الأدوية لأفراد عائلة CDK الأقل دراسة. تُبرز هذه الورقة البحثية أهمية تحديد انتقائية الدواء عبر عائلة CDK في الخلايا الحية. وقد وسّعت أنظمة NanoBRET® TE لانتقائية CDK نطاق هذا العمل، مُبسّطةً سير العمل باستخدام اختبار NanoBRET® TE واحد (K-10) ولوحات ناقل CDK جاهزة للاستخدام.
ويلز، سي آي
وآخرون
(2020) تحديد كمية انتقائية مثبطات CDK في الخلايا الحية.
اللجنة الوطنية
11
2743.