Qiagen، 1027417، FlexiTube سيرنا (5 نانومول)

تم توصيل 5 نانومول من الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) في أنابيب

سمات

- يتيح استخدام الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) منخفض التكلفة تحليل المزيد من الجينات
- حلول مثالية لكل جين
- يقلل التصميم المبتكر من خطر الآثار الجانبية غير المقصودة
- سهولة البحث عن siRNA وطلبه في GeneGlobe

تفاصيل المنتج

يتوفر منتجان مختلفان من FlexiTube: FlexiTube siRNA وFlexiTube GeneSolution. يُعد FlexiTube siRNA حلاً اقتصادياً لتحليل تداخل الحمض النووي الريبوزي (RNAi) لعدد قليل من الجينات. تتوفر جزيئات siRNA بكميات 5 نانومول أو 20 نانومول لجينات الإنسان والفأر والجرذ، أو بكميات اقتصادية تبلغ 1 نانومول لجينات الإنسان والفأر.

FlexiTube GeneSolution عبارة عن حزمة جينية مُخصصة تحتوي على 4 جزيئات siRNA مُختارة مُسبقًا (1 نانومول) لجين مُستهدف. تُمكّن FlexiTube GeneSolutions الباحثين من استخدام جزيئات siRNA مُتعددة لكل هدف، مما يضمن نتائج موثوقة. تم تصميم FlexiTube siRNA وFlexiTube GeneSolutions باستخدام تقنية HP OnGuard siRNA Design المُبتكرة، وهما مُتاحان على بوابة GeneGlobe الإلكترونية التابعة لشركة QIAGEN.

أداء

الميزة: الوصف
تقنية الشبكة العصبية: يستخدم تصميم siRNA الشبكة العصبية BioPredsi، والتي تعتمد على مجموعة بيانات RNAi ضخمة للغاية.
أكبر مشروع للتحقق من صحة الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) في العالم: تم تعزيز عملية التصميم وتحسينها بفضل البيانات المستقاة من هذا المشروع، حيث أثبت علماء شركة QIAGEN فعالية آلاف من جزيئات siRNA. وقد ثبت خلال هذا المشروع أن عددًا كبيرًا من جزيئات siRNA الجينية القابلة للاستهداف الدوائي توفر تثبيطًا بنسبة 70% على الأقل.
تحليل التماثل: يستخدم التحليل أداة خاصة وقاعدة بيانات تسلسلية حديثة وغير متكررة.
تحليل Affymetrix GeneChip: مكّن التحليل على مستوى الجينوم من تطوير تحسينات في تصميم siRNA التي تقلل من التأثيرات غير المستهدفة.
تسلسلات هدف siRNA المحدثة: تضمن البيانات الحالية من قواعد بيانات NCBI تصميمًا دقيقًا.
عدم التناظر: تُصمَّم جزيئات siRNA باستقرار غير متساوٍ لأزواج القواعد عند نهاياتها 5'. يسمح هذا للسلسلة المضادة، الأقل ارتباطًا بنهايتها 5'، بالدخول إلى مُركَّب RISC، بينما تتحلل السلسلة المتوافقة. ينتج عن عدم التناظر جزيئات siRNA عالية الفعالية، ويقلل من خطر التأثيرات الجانبية الناتجة عن دخول السلسلة غير الصحيحة إلى مُركَّب RISC.
تحليل منطقة 3' UTR/البذور: يستخدم التحليل عمليات بحث متعددة المعلمات موزونة بذكاء للعثور على تطابقات منطقة البذور لسلسلة siRNA المضادة مع المنطقة غير المترجمة 3' لأهداف mRNA غير المقصودة (انظر النص لمزيد من التوضيح).
تجنب تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNP): تُستخدم قاعدة بيانات RefSNP لاستبعاد جزيئات siRNA التي تغطي تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNPs). يزيد هذا من فعالية siRNA، حيث أن فعالية siRNA الذي يغطي SNP ستختلف.
تجنب أنماط الإنترفيرون: يتم فحص جزيئات siRNA بحثًا عن أنماط تسلسل متعددة معروفة بأنها تؤدي إلى استجابة الإنترفيرون. يتم رفض جزيئات siRNA التي تحتوي على هذه الأنماط.

ضمان الأداء

يأتي منتج FlexiTube siRNA مع عرض استبدال لمرة واحدة فقط. في حال طلب عدة منتجات FlexiTube siRNA لنفس الجين المستهدف، ولم يحقق اثنان منها على الأقل نسبة تثبيط ≥70% للجين المستهدف، ستوفر QIAGEN منتجين إضافيين مجانًا، لمرة واحدة فقط. سيُطلب منك تقديم بيانات داعمة تُثبت فشل المنتج في تثبيط الجين المستهدف بنسبة 70% على الأقل على مستوى mRNA في ظل ظروف النقل المناسبة. يجب أن تتضمن البيانات الداعمة بيانات كفاءة النقل، وبيانات التثبيط الكمي، وبيانات تُظهر نسبة تثبيط ≥70% لعينة تحكم موجبة. يسري هذا العرض لمدة تصل إلى 6 أشهر من تاريخ التسليم.

آلاف من جزيئات الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) التي تم التحقق منها تجريبياً

تم التحقق تجريبياً من آلاف جزيئات siRNA البشرية الخاصة بنا باستخدام تحليل RT-PCR في الوقت الحقيقي، وثبت أنها توفر تثبيطاً بنسبة 70% على الأقل. بالنسبة لهذه الجزيئات التي تم التحقق منها، تتوفر تفاصيل تجريبية ومعلومات حول مستوى التثبيط المُحقق في قاعدة بيانات GeneGlobe. تُعد هذه الجزيئات التي تم التحقق منها تجريبياً نتاج أكبر مشروع للتحقق من صحة جزيئات siRNA في العالم، والذي نفذه علماء شركة QIAGEN. لمعرفة المزيد عن هذا المشروع، يُرجى مراجعة المنشور Krueger, U. et al. (2007) Insights into Effective RNAi Gained from Large-Scale siRNA Validation Screening. Oligonucleotides 17, 237.

تصميم متطور لـ siRNA

تضمن التطورات في عملية تصميم الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) أن يوفر نظام HP OnGuard siRNA Design المبتكر والمتطور من QIAGEN جزيئات siRNA فعالة ومحددة. تُصمم جزيئات siRNA باستخدام تقنية الشبكات العصبية بالاعتماد على مجموعة بيانات ضخمة للغاية من تجارب التداخل الريبوزي (RNAi). بعد ذلك، يُفحص تصميم siRNA للتأكد من تطابقه مع جميع تسلسلات الجينوم الأخرى باستخدام قاعدة بيانات تسلسلية حديثة وغير متكررة وأداة تحليل تطابق خاصة. يتضمن نظام HP OnGuard siRNA Design العديد من الميزات الفريدة والمتقدمة (انظر الجدول).

تحليل منطقة 3' غير المترجمة/منطقة البذور

أظهرت العديد من الدراسات أن التأثيرات غير المستهدفة قد تنجم عن تطابق منطقة البذرة في السلسلة المضادة لـ siRNA مع المنطقة غير المترجمة 3' لأهداف mRNA غير المقصودة (انظر الجدول). تتكون منطقة البذرة من 6 نيوكليوتيدات في المواضع من 2 إلى 7 من السلسلة المضادة لـ siRNA في جزيء siRNA المزدوج. يمكن أن تُسهم هذه التطابقات في تثبيط الأهداف غير المقصودة نظرًا لأن siRNA يُحاكي عمل miRNA. يتم تحليل siRNA المُصمم في QIAGEN للتحقق من تكامل منطقة 3' غير المترجمة/منطقة البذرة باستخدام مجموعة خاصة من تسلسلات 3' غير المترجمة المُستمدة من قواعد بيانات RefSeq الخاصة بالإنسان والفأر والجرذ. تتم محاذاة كل siRNA مع هذه التسلسلات للتحقق من أي تشابه قد يُسهم في تأثيرات غير مستهدفة تُشبه تأثيرات miRNA.

يُعدّ تطابق ستة نيوكليوتيدات من أصل ستة في منطقة البذور الخاصة بجزيء siRNA مع تسلسل 3' UTR لجين مستهدف غير ذي صلة أمرًا شائعًا، وليس من الضروري أو العملي استبعاد جزيئات siRNA التي تُظهر مثل هذه التطابقات. وفي حالات نادرة، تُلاحظ تطابقات منطقة البذور بالإضافة إلى عشرة قواعد أو أكثر من التماثل الإضافي في تسلسل siRNA. ويحمل هذا التماثل احتمالية أكبر للتسبب في تأثيرات خارج الهدف، ولذا، يُستبعد هذا الجزيء من جزيئات siRNA، حيثما أمكن، لصالح جزيئات أخرى ذات تماثل أقل أهمية مع جينات مستهدفة غير مقصودة.

بالنسبة لبعض الأهداف، لا يمكن اختيار جزيئات siRNA التي لا تُظهر أي تشابهات من هذا القبيل. في هذه الحالات، تُوفّر قاعدة بيانات GeneGlobe معرّفات EntrezGene للجينات غير المرتبطة التي قد تكون أهدافًا غير مقصودة لجزيئات siRNA. لا يعني وجود هذا النوع من التشابه بالضرورة أن هذه الجينات ستتأثر بجزيئات siRNA، ولكن يمكن اعتبارها أهدافًا غير مقصودة محتملة لإجراء تحليل لاحق، إذا لزم الأمر.

مبدأ

تتيح تقنية FlexiTube siRNA طلب كميات صغيرة من جزيئات siRNA بأسعار اقتصادية تبلغ 1 نانومول (الحد الأدنى للطلب هو 4 جزيئات siRNA)، أو بكميات 5 نانومول و20 نانومول. تُقدم جزيئات siRNA مجففة بالتجميد في أنابيب.

FlexiTube GeneSolution لحلول مثالية خاصة بالجينات

للحصول على حلٍّ مُبسَّط لتقنية التداخل الرناوي (RNAi) لجينك المستهدف، ما عليك سوى إدخال تفاصيل جينات الإنسان أو الفأر التي تهمك في بوابة GeneGlobe الإلكترونية. ستعرض نتائج البحث حل FlexiTube GeneSolution، وهو عبارة عن 4 جزيئات siRNA مُوصى بها لكل جين، مُقدَّمة بكميات 1 نانومول. توصي الإرشادات المنشورة بإجراء تجارب التكرار لضمان دقة الإبلاغ عن نتائج تجارب التداخل الرناوي (Echeverri, CJ et al. (2006) Minimizing the risk of reporting false positives in large-scale RNAi screens. Nat. Methods. 3, 777; Echeverri, CJ and Perrimon, N. (2006) High-throughput RNAi screening in cultured cells: a user's guide. Nature Reviews Genetics 7, 373.). تستخدم تجارب التكرار عدة جزيئات siRNA مختلفة تستهدف مناطق مختلفة من نفس mRNA لاستبعاد التأثيرات غير المستهدفة. يُستحث النمط الظاهري غير المستهدف بواسطة نمط محدد من النسخ المُثبَّطة المتبادلة لجزيء siRNA. وبما أن هذا النمط مُستمد مباشرةً من تسلسل siRNA، فمن غير المرجح أن تشترك عدة جزيئات siRNA ذات تسلسلات مختلفة في نفس التأثيرات غير المستهدفة المُستمدة من التسلسل. يُعد تأكيد النمط الظاهري باستخدام عدة جزيئات siRNA متميزة طريقة سهلة التطبيق ومقنعة لإثبات خصوصية siRNA. تُمكّن حلول FlexiPlate GeneSolutions من إجراء تجارب التكرار لجينات الإنسان والفأر. تُوصي شركة QIAGEN بجزيئات siRNA لكل جين، مما يجعل الحل الأمثل لتجاربك في متناول يديك!

تم توفير معلومات كاملة عن تسلسل الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA).

تُقدَّم جميع جزيئات siRNA مع معلومات تسلسلها مجانًا. يتيح الكشف الكامل عن التسلسل معلوماتٍ لتحليل النتائج التجريبية والتحقق من تثبيط التعبير الجيني. ويمكن تضمين تسلسلات siRNA في المنشورات البحثية، عند الحاجة.

خيارات التعديل

تتوفر جزيئات siRNA من نوع FlexiTube بكميات 20 نانومول مع علامات، بما في ذلك أصباغ Alexa Fluor، والفلوريسين، والرودامين، وCy3، وCy5، أو خيارات التعديل مثل روابط الأمينو، وروابط الثيو، وتعديلات الفوسفات.

إجراء

نوصي باستخدام كاشف النقل HiPerFect للنقل منخفض الإنتاجية وHiPerFect HTS للنقل عالي الإنتاجية لـ siRNA.

التطبيقات

يُعد كل من FlexiTube siRNA و FlexiTube GeneSolution مثاليين لعلم الجينوم الوظيفي أو تحليل المسارات مع أعداد صغيرة من الجينات المستهدفة.