كياجين، 1054578، مجموعة نقل البلازميد عالية السرعة ميجا إي إف (5)

مجموعة HiSpeed ​​Plasmid Mega EF (5)

سمات

- وقت تحضير يبلغ حوالي 50 دقيقة
- تصفية المستخلص وترسيب الإيزوبروبانول بدون طرد مركزي
- لا يوجد خطر لفقدان حبيبات الحمض النووي أثناء الترسيب
- إنتاج يصل إلى 10 ملغ من الحمض النووي البلازميدي عالي النسخ
- محلول LyseBlue لتحقيق التحلل الأمثل وأقصى إنتاجية للحمض النووي
- تم تضمين إزالة السموم الداخلية (<0.04 وحدة سمية داخلية/ميكروغرام من الحمض النووي)

تفاصيل المنتج

توفر مجموعات HiSpeed ​​Plasmid Mega و Giga EF تحضيرًا واسع النطاق لحمض البلازميد النووي باستخدام تقنية التبادل الأيوني، وذلك عبر نظام تفريغ الهواء، ولا تتطلب سوى خطوة طرد مركزي واحدة لاستخلاص حمض البلازميد النووي النهائي. يُعادل الحمض النووي المُنقّى الناتج الحمض النووي المُستخلص بتقنية الطرد المركزي المتدرج باستخدام كلوريد السيزيوم مرتين، وهو مناسب لتطبيقات نقل الجينات. يتطلب هذا البروتوكول استخدام جهاز تفريغ الهواء QIAvac HiSpeed ​​LS.

يجب استخدام مجموعات HiSpeed ​​EF Mega Giga مع QIAvac HiSpeed ​​LS.

أداء

تحتوي مجموعات HiSpeed ​​Plasmid Mega و Giga EF على خراطيش QIAfilter، ورؤوس HiSpeed، ووحدات QIAconcentrator لتحضير البلازميدات بسرعة وعلى نطاق واسع باستخدام نظام تفريغ. تحل وحدة QIAfilter التي تعمل بالتفريغ محل خطوة الطرد المركزي في إجراء التبادل الأيوني التقليدي، مما يجعل عملية التنقية أسرع وأكثر ملاءمة. توفر وحدة QIAconcentrator حمضًا نوويًا عالي التركيز عن طريق الطرد المركزي بعد الترسيب بالإيثانول. يمكن تنقية ما يصل إلى 2.5 ملغ (Mega) أو 10 ملغ (Giga) من الحمض النووي البلازميدي عالي النسخ من 500 مل أو 2.5 لتر من المزرعة، على التوالي (تعتمد أحجام المزرعة على عدد نسخ البلازميد، وحجم الإدخال، وسلالة المضيف، ووسط المزرعة). يسمح تصميم رأس HiSpeed ​​بمعدل تدفق عالٍ جدًا، مما يسمح بخطوات ربط الحمض النووي، والغسل، والإذابة لتنقية البلازميد بشكل أسرع. الحمض النووي البلازميدي المشتق من HiSpeed ​​خالٍ من السموم الداخلية (<0.04 سم داخلي/ميكروغرام من الحمض النووي).

تم تطوير راتنج التبادل الأيوني الفريد في رؤوس HiSpeed ​​خصيصًا لتنقية الأحماض النووية. وتؤدي خصائصه الاستثنائية في الفصل إلى نقاء الحمض النووي DNA يعادل أو يفوق النقاء الناتج عن جولتين متتاليتين من الطرد المركزي المتدرج باستخدام كلوريد السيزيوم. تعمل مجموعات HiSpeed ​​Plasmid Mega وGiga EF على إزالة السموم الداخلية البكتيرية التي تُطلق أثناء عملية التحلل وتؤثر على نقل الحمض النووي DNA إلى الخلايا الأولية والخلايا المزروعة الحساسة. يُعد الحمض النووي DNA الخالي من السموم الداخلية، والمُستخلص من مجموعات HiSpeed ​​Plasmid Mega/Giga EF، مناسبًا للغاية للحصول على نتائج قابلة للتكرار وموثوقة في عملية النقل. كما يُعد الحمض النووي DNA فائق النقاء والخالي من السموم الداخلية من QIAGEN مناسبًا أيضًا لأبحاث العلاج الجيني والتطبيقات الحساسة الأخرى.

مبدأ

الميزات: مجموعة HiSpeed ​​Plasmid Mega EF
التطبيقات: نقل الجينات، استنساخ التسلسل، إسكات الجينات
حجم المزرعة/المادة الأولية: 500 مل حجم المزرعة
نوع البلازميد: حمض نووي كوزميدي عالي النسخ
المعالجة: الفراغ، الطرد المركزي
عدد العينات لكل تشغيل: 6 عينات لكل تشغيل
التكنولوجيا: تكنولوجيا التبادل الأيوني السالب
مدة كل جولة: 50 دقيقة
الناتج: 2.5 ملغ

خراطيش QIAfilter (انظر الشكل "خرطوشة QIAfilter Mega-Giga") هي وحدات ترشيح خاصة مصممة لتحل محل خطوة الطرد المركزي بعد التحلل القلوي للخلايا البكتيرية. تزيل خراطيش QIAfilter رواسب SDS تمامًا وتُنقي مستخلصات البكتيريا في جزء بسيط من الوقت اللازم للطرد المركزي. تعمل رؤوس HiSpeed ​​المعبأة مسبقًا بتدفق الجاذبية ولا تجف أبدًا، مما يقلل من الوقت اليدوي المطلوب لتحضير البلازميد.

يستبدل جهاز QIAconcentrator الفريد (انظر الشكل "إجراء HighSpeed ​​Plasmid Giga EF") خطوة الطرد المركزي المستخدمة تقليديًا لجمع الحمض النووي المترسب بالإيزوبروبانول بعد التنقية. يقوم جهاز QIAconcentrator باحتجاز الحمض النووي المترسب، بينما يتدفق مزيج الإيزوبروبانول والمحلول المنظم عبره. بعد ذلك، يُستخلص الحمض النووي ببساطة من جهاز QIAprecipitator إلى أنبوب تجميع باستخدام محلول منظم TE أو الماء. كما يزيل هذا الجهاز الفريد خطر فقدان الراسب، والذي قد يحدث أثناء سكب السائل الطافي بعد الطرد المركزي.

السموم الداخلية، المعروفة أيضًا باسم عديدات السكاريد الدهنية أو LPS، هي مكونات غشاء الخلية للبكتيريا سالبة الغرام مثل الإشريكية القولونية (انظر الشكل "جدار الخلية البكتيرية"). تُطلق السموم الداخلية خلال مرحلة تحلل البلازميد أثناء عملية التنقية، وتُقلل بشكل ملحوظ من كفاءة نقل الجينات في سلالات الخلايا الحساسة للسموم الداخلية. علاوة على ذلك، يمكن أن تؤثر السموم الداخلية على امتصاص الحمض النووي للبلازميد في تجارب نقل الجينات من خلال التنافس مع الحمض النووي على كاشف نقل الجينات "الحر".

تُحفز السموم الداخلية أيضًا تنشيطًا غير نوعي للاستجابات المناعية في الخلايا المناعية، مثل البلاعم والخلايا البائية، مما قد يؤدي إلى سوء تفسير نتائج عملية النقل الجيني. تشمل هذه الاستجابات تحفيز تخليق البروتينات والدهون، مثل إنترلوكين-1 والبروستاجلاندين. عمومًا، تُمثل السموم الداخلية متغيرًا خارجًا عن السيطرة في تصميم تجارب النقل الجيني، إذ تؤثر على النتائج وقابليتها للتكرار، مما يجعل مقارنتها وتفسيرها أمرًا صعبًا. في أبحاث العلاج الجيني، قد تتداخل السموم الداخلية عن طريق التسبب في متلازمة الصدمة السمية الداخلية وتنشيط سلسلة المتممة.

إجراء

تُحضن مستخلصات البكتيريا المُعادلة في خرطوشة QIAfilter وتُصفى في ثوانٍ باستخدام التفريغ. في هذه المرحلة، يُضاف محلول إزالة السموم الداخلية إلى المستخلص المُرشح. لا حاجة للتحضين. يُوضع المُرشح على طرف HiSpeed ​​لتنقية الحمض النووي البلازميدي (انظر الشكل "إجراء HighSpeed ​​Plasmid Giga EF"). يُخلط الحمض النووي المُستخلص مع الإيزوبروبانول ويُوضع على جهاز QIAconcentrator باستخدام التفريغ ويُغسل. بعد ذلك، يُستخلص الحمض النووي المُركز والمُزال منه الأملاح من جهاز QIAconcentrator مباشرةً في أنبوب تجميع جديد مع محلول TE أو الماء.

التطبيقات

تُعطي مجموعات HiSpeed ​​Plasmid Mega و Giga EF نتائج ممتازة في جميع التطبيقات، بدءًا من الاستنساخ والتسلسل، وحتى نقل الجينات إلى الخلايا الحساسة للغاية والخلايا الأولية، وإسكات الجينات بوساطة البلازميد.