Qiagen، 150052، مجموعة REPLI-g Cell WGA & WTA (12)

بوليميراز الحمض النووي REPLI-g SensiPhi، والمحاليل المنظمة، والكواشف لتفاعلات تضخيم الجينوم الكامل المتوازية 12 × 60 ميكرولتر وتفاعلات تضخيم النسخ الكامل 12 × 60 ميكرولتر (العائد النموذجي: 20 ميكروغرام من كل تفاعل)

سمات

- التضخيم المتوازي للحمض النووي الجينومي والحمض النووي الريبي (الكلي أو الغني بالحمض النووي الريبي الرسول)
- ربط الحالة الجينومية بسهولة بنمط النسخ
- تحيز تسلسلي ضئيل بسبب تقنية MDA
- تضخيم الحمض النووي الجينومي (gDNA) والحمض النووي الريبوزي (RNA) مباشرة من الخلايا أو الأنسجة
- للاستخدام مع جميع التطبيقات اللاحقة، بما في ذلك تقنية NGS

أداء

مادة العينة (الخلايا/الحمض النووي الريبي الكلي): مجال البحث
السرطان: تحليل المتغيرات الجينية الجسدية
تطور الورم
الخلايا الجذعية السرطانية/التطور
عدم تجانس الورم
تحليل المتغيرات الجينية الجسدية
الإنسان/الحيوان: أبحاث المؤشرات الحيوية (تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة، الطفرات، تغيرات عدد النسخ)
دراسات الفسيفساء
أبحاث الخلايا الجذعية
دراسات الاستعداد الوراثي

تغطية جينومية ونسخية كاملة، مع تباين تجريبي منخفض

مثالي لتحليل السمات الجينومية والترانسكريبتومية للعينات المحدودة

للاستخدام في مجموعة واسعة من مجالات البحث

مبدأ

تخضع جميع الإنزيمات ومكونات التضخيم في المجموعة لعملية تطهير فريدة ومضبوطة لضمان التخلص من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي الملوث القابل للتضخيم بواسطة REPLI-g. بعد هذه العملية، تخضع المجموعات لرقابة صارمة على الجودة لضمان عملها بكفاءة تامة.
- يعمل محلول التحلل الفريد على تثبيت الحمض النووي الريبوزي (RNA) والحمض النووي (DNA) الخلويين بشكل فعال. وهذا يضمن أن يعكس الحمض النووي الريبوزي الناتج بدقة نمط التعبير الجيني في الجسم الحي، وأن يبقى الحمض النووي الريبوزي والحمض النووي سليمين، مما يزيد من تغطية الجينوم للتحليلات اللاحقة.
- تم تطوير جميع الخطوات الإنزيمية خصيصًا لتمكين المعالجة الفعالة للحمض النووي الريبي (RNA) أو الحمض النووي (DNA) من أجل تضخيم دقيق. على سبيل المثال، تشمل هذه العمليات إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) بشكل فعال قبل تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) لتضخيم الحمض النووي الريبي (RNA)، وإعداد الحمض النووي (DNA) إنزيميًا لضمان تضخيم الحمض النووي (DNA) بكفاءة.
يُستخدم إنزيم بوليميراز الحمض النووي REPLI-g SensiPhi الجديد في تضخيم الإزاحة المتعددة (MDA). وهو إنزيم مُطوَّر حديثًا ذو ألفة عالية، يرتبط بالحمض النووي بكفاءة أكبر، خاصةً عندما يكون تركيز الحمض النووي منخفضًا في مزيج التفاعل. إضافةً إلى ذلك، وعلى عكس الطرق القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، يتميز إنزيم بوليميراز الحمض النووي REPLI-g SensiPhi بنشاط تدقيق قوي يُقلل الأخطاء بمقدار 1000 ضعف. كما يتميز بنشاط إزاحة قوي للسلسلة، مما يُتيح تضاعف الحمض النووي من خلال هياكل دبوسية مستقرة مقاومة لإجراءات تضخيم الجينوم الكامل والترانسكريبتوم الكامل القائمة على إنزيم Taq.

مكونات فريدة من نوعها لمجموعة REPLI-g Cell WGA & WTA

إجراء

- تحلل الخلايا: يتم تحلل عينة (تحتوي على 25-1000 خلية) بكفاءة خلال 5 دقائق، دون أي تأثير على سلامة الحمض النووي الريبوزي (RNA) أو الحمض النووي (DNA). تُقسم الخلايا المتحللة إلى جزأين متساويين في الحجم. يُستخدم الجزء الأول لتضخيم الجينوم الكامل (WGA)، بينما يُستخدم الجزء الثاني لتضخيم الحمض النووي الريبوزي الكلي (WTA)، أو بديلًا لذلك، الحمض النووي الريبوزي المُخصب بالحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) (poly A+).
- تضخيم الجينوم الكامل: بعد تحلل الخلايا، يُعدَّل الحمض النووي من إحدى العينات لضمان ربط عالي الكفاءة. ونظرًا لطبيعة تفاعل الربط، لا تتجمع شظايا الحمض النووي بالترتيب الذي كانت عليه في الأصل داخل الكائن الحي. مع ذلك، لا يؤثر هذا على كشف تسلسلات الأحماض النووية (مثل تعدد الأشكال) في التطبيقات اللاحقة، مثل تقنية التسلسل عالي الإنتاجية (NGS) أو تحليل المصفوفات أو تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR). بعد الربط، يتم التضخيم باستخدام تقنية تضخيم الحمض النووي المتعدد (MDA) وإنزيم بوليميراز الحمض النووي REPLI-g SensiPhi الجديد عالي الألفة.
- تضخيم كامل النسخ الجيني: بعد تحلل الخلايا، يُزال الحمض النووي الجينومي من العينة الثانية قبل بدء عملية تضخيم كامل النسخ الجيني، لأن دقة قياس مستويات النسخ تعتمد على استبعاد النتائج الإيجابية الكاذبة الناتجة عن تلوث الحمض النووي الجينومي. يُحضّر الحمض النووي التكميلي (cDNA) لربطه وتضخيمه بكفاءة عالية. بناءً على البادئ المُختار خلال تفاعل النسخ العكسي اللاحق، سيتم تضخيم جميع النسخ لإثراء الحمض النووي الريبوزي الكلي، أو النسخ متعددة الأدينين فقط لإثراء الحمض النووي الريبوزي الرسول متعدد الأدينين.

التطبيقات

- mRNA ذو ذيل متعدد الأدينين
- الحمض النووي الريبي الكلي
- جميع مناطق نسخ الحمض النووي الريبوزي
- نهايات 3' من الحمض النووي الريبوزي الرسول
- الحمض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (lnc) والحمض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (linc RNA)

- الحمض النووي الجينومي
- الحمض النووي للميتوكوندريا

- الحمض النووي الريبوزي الناقل (tRNA) والحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)
- الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي المتدهور بشدة

تتيح مجموعة REPLI-g Cell WGA & WTA تضخيمًا متوازيًا وموحدًا لجميع النسخ والمناطق الجينومية من عينة صغيرة جدًا. يُعد كل من الحمض النووي الجينومي (gDNA) والحمض النووي التكميلي (cDNA) المُضخّمين بالتوازي بواسطة هذه المجموعة مناسبين للغاية لتسلسل الجيل التالي (DNA-Seq وRNA-Seq*)، والتحليل باستخدام المصفوفات، وتطبيقات تحديد النمط الجيني، أو تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR).

تُعد مجموعة REPLI-g Cell WGA & WTA مناسبة لتضخيم ما يلي:

النسخ الجيني (RNA):

الجينوم (الحمض النووي):

لا يُناسب استخدامه مع الأحماض النووية الصغيرة (على سبيل المثال):