Product Description
بوليميراز الحمض النووي، والمحاليل المنظمة، والكواشف اللازمة لتفاعلات تضخيم الجينوم الكامل بحجم 100 × 50 ميكرولتر
سمات
- تضخيم الجينوم الكامل مباشرة من مقاطع البارافين
- تضخيم الجينوم الكامل للحمض النووي المنقى من أنسجة مثبتة بالفورمالين ومضمنة في البارافين
- إنتاجية الحمض النووي قابلة للتطوير وموحدة: تصل إلى 40 ميكروغرام لكل شريحة نسيجية
بروتوكول سريع وسهل للحصول على نتائج سريعة
تفاصيل المنتج
يمكن التغلب على نقص كميات كافية من الحمض النووي الجينومي لتحليل الجينوم من خلال التضخيم الشامل لجميع الحمض النووي داخل العينة (تضخيم الجينوم الكامل). تتكون مجموعة REPLI-g FFPE من بوليميراز الحمض النووي، ومحاليل منظمة جديدة، وكواشف تُمكّن من تضخيم الجينوم الكامل بكفاءة من الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE) دون الحاجة إلى تنقية الحمض النووي مسبقًا. بعد تحلل شريحة النسيج، تتم معالجة الحمض النووي بحيث يتم ربط أجزاء الحمض النووي المجزأة. ثم يتم تضخيم خيوط الحمض النووي الطويلة الناتجة باستخدام تقنية REPLI-g المُثبتة.
أداء
بالنسبة للبروتوكولين ذوي أوقات التضخيم المختلفة، تصل العوائد النموذجية لكل تفاعل 50 ميكرولتر مع قوالب ذات جودة قياسية إلى 10 ميكروغرام بعد ساعتين من التضخيم (التفاعل القياسي) وتصل إلى 40 ميكروغرام بعد 8 ساعات من التضخيم (التفاعل عالي العائد).
مبدأ
غالباً ما يكون توفر كميات كافية من الحمض النووي الجينومي لإجراء التحليل الجينومي غير متوفر. يتغلب تضخيم الجينوم الكامل (WGA) على هذا القيد من خلال التضخيم الشامل لجميع الحمض النووي داخل العينة، مما يوفر كميات كافية لإجراء جميع التحليلات على نفس عينة الحمض النووي.
يُمكّن التنميط الجيني لعينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE) من ربط التغيرات المورفولوجية في الأنسجة مباشرةً بطفرات جينومية محددة. مع ذلك، يُسبب التثبيت بالفورمالين تلفًا لا رجعة فيه للحمض النووي، مما ينتج عنه حمض نووي مجزأ مرتبط بجزيئات حيوية أخرى داخل العينة. إضافةً إلى ذلك، فإن كمية الحمض النووي المحدودة التي يمكن استخلاصها من عينات أنسجة FFPE لا تكفي إلا لعدد قليل من التحليلات.
تتغلب مجموعة REPLI-g FFPE على هذه المشكلات من خلال إجراء يتضمن تفاعل معالجة الحمض النووي المبتكر الذي يُحضّر ويربط الحمض النووي المجزأ (انظر الشكل "مبدأ REPLI-g FFPE"). ثم يتم تضخيم الجينوم الكامل لهذا الحمض النووي المربوط عشوائيًا باستخدام تقنية REPLI-g المُثبتة. تجمع منتجات REPLI-g بين تضخيم الإزاحة المتعددة (MDA) وبوليميراز الحمض النووي عالي الكفاءة. بفضل كفاءة المعالجة العالية ونشاط إزاحة السلسلة، يُقلل بوليميراز الحمض النووي REPLI-g من عدم تساوي تمثيل التسلسل والموقع. وهذا يوفر نتائج أكثر موثوقية مقارنةً بطرق تضخيم الجينوم الكامل القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يسمح تفاعل معالجة الحمض النووي المبتكر بتوسيع مزايا MDA لتشمل عينات الحمض النووي شديدة التدهور المُستخلصة من أنسجة FFPE. يمكن تضخيم عينات قيّمة مع الحفاظ على تمثيل الموقع، مما يُتيح إجراء تحليلات لاحقة غير محدودة.
إجراء
يُتيح بروتوكول REPLI-g FFPE تضخيم الحمض النووي المُنقّى من عينات الأنسجة المُثبّتة بالفورمالين والمُضمّنة في البارافين (FFPE)، أو الحمض النووي مباشرةً من عينات الأنسجة المُثبّتة بالفورمالين والمُضمّنة في البارافين دون الحاجة إلى تنقية مسبقة. بعد تحليل مقطع النسيج، يُعالَج الحمض النووي باستخدام محاليل مُنظّمة وإنزيمات مُبتكرة لربط الحمض النووي المُجزّأ (انظر مُخطّط "إجراء REPLI-g FFPE" والشكل "الحمض النووي المربوط ذو الوزن الجزيئي العالي"). تُضخّم خيوط الحمض النووي الطويلة الناتجة عن تفاعل الربط باستخدام تقنية REPLI-g المُثبتة. بمجرد تضخيمه، يكون الحمض النووي جاهزًا للاستخدام الفوري في مُعظم فحوصات التنميط الجيني اللاحقة دون الحاجة إلى مزيد من التنقية.
يُعدّ الحمض النووي المُضخّم باستخدام تقنية REPLI-g FFPE مناسبًا جدًا للاستخدام في تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (مثل استخدام مجموعات QuantiFast) وتفاعل البوليميراز المتسلسل النهائي (مثل استخدام مجموعة QIAGEN Fast Cycling PCR)، مع تفضيل أن يكون ناتج التضخيم أصغر من متوسط حجم قطعة الحمض النووي الأصلية. وتشمل التطبيقات الأخرى تحليل التكرارات الميكروية (انظر الشكل "تحليل التكرارات الميكروية الموثوق") وتحديد النمط الجيني للنيوكليوتيدات المفردة المتغيرة (قد لا يكون الحمض النووي المُضخّم بتقنية REPLI-g FFPE مناسبًا لطرق تحديد النمط الجيني التي تتطلب هضمًا إنزيميًا لوسم الحمض النووي).
التطبيقات
- تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي
- تفاعل البوليميراز المتسلسل النهائي
- تحديد النمط الجيني للنيوكليوتيدات المفردة
- تحليل الميكروساتلايت
يُعد الحمض النووي المُضخّم باستخدام إجراء REPLI-g FFPE مناسبًا جدًا للاستخدام في:
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924