Qiagen، 180785، QIAseq Single Cell RNA Lib Kit UDI-D (96)

لـ 96 تفاعلًا: محاليل منظمة وكواشف لتحليل الخلايا، وتضخيم كامل النسخ الجيني، وإعداد المكتبة، بما في ذلك تجزئة الحمض النووي، وإصلاح الأطراف، وربط المحولات؛ تتضمن خرزات QIAseq ولوحة تحتوي على 96 محولًا مشفرًا برمز UDI (المجموعة D) للاستخدام مع أجهزة Illumina
عرض المزيد

سمات

- ابدأ بخلايا مفردة، أو مجموعات من الخلايا، أو قم بإثراء الجينومات الصغيرة من الحمض النووي الريبي أو الفيروسات
- اختر التركيز على الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA)، أو استكشف النسخ الجيني
- يقلل تضخيم الحمض النووي الريبوزي REPLI-g وبروتوكول خالٍ من تفاعل البوليميراز المتسلسل من التحيز ويوفر قابلية تكرار أكبر
- تضمن المؤشرات المزدوجة الفريدة (المضمنة) بيانات عالية الجودة من NovaSeq وخلايا التدفق النمطية
- مكتبات جاهزة للتسلسل من خلايا مفردة معزولة في غضون 5.5 ساعات فقط

تفاصيل المنتج

مجموعة QIAseq Single Cell RNA Library Kit UDI هي حل متكامل لتحضير مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) من الخلايا المفردة، أو مجموعات الخلايا، أو كميات صغيرة من الحمض النووي الريبوزي. تتضمن المجموعة جميع الكواشف اللازمة لتحليل الخلايا، والنسخ العكسي، وتضخيم الحمض النووي التكميلي (cDNA)، وتحضير مكتبات التسلسل الجيني عالي الإنتاجية (NGS) بدون تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، بما في ذلك خرز QIAseq لتنظيف نواتج التفاعل، ومجموعات QIAseq Unique Dual-Index Y-Adapter Kits لفهرسة العينات. تُنتج هذه المجموعة مكتبات NGS عالية الجودة، وتُنتج أنبوبًا يحتوي على كمية زائدة من الحمض النووي التكميلي المُضخّم، والذي يمكن تخزينه لإجراء تجارب لاحقة. تُعد هذه المجموعة مناسبة جدًا لاكتشاف النسخ الجينية والتعبير الجيني التفاضلي من الخلايا حقيقية النواة المفردة، ومجموعات الخلايا المُثرية، وتسلسل الحمض النووي الريبوزي من عينات محدودة، بما في ذلك الحمض النووي الريبوزي الفيروسي.

تتيح مجموعة QIAseq Single Cell RNA Library Kit UDI للباحثين التركيز على الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA)، واستكشاف النسخ الجيني (mRNA وlncRNA)، أو إثراء جينومات الحمض النووي الريبوزي الصغيرة (مثل الفيروسات) من عينات الحمض النووي الريبوزي ذات المدخلات المنخفضة. تُمكّن هذه المجموعة متعددة الاستخدامات من تطبيقات تسلسل الحمض النووي الريبوزي المتعددة من خلال الاختيار من بين عدة بروتوكولات مختلفة مضمنة في المجموعة.

قم بتحليل بيانات RNA-seq بسهولة باستخدام بوابة تحليل RNA-seq المتكاملة مع GeneGlobe - وهو حل تحليل بيانات بديهي قائم على الويب تم إنشاؤه لعلماء الأحياء ومضمن في مجموعة QIAseq هذه.

أداء

تكشف هذه المجموعة عن عدد أكبر من النسخ مقارنةً بالطرق المنافسة عند أي عمق تسلسل. في بعض عمليات تسلسل الحمض النووي الريبوزي أحادي الخلية، يُستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) على نطاق واسع لتضخيم الحمض النووي المكمل (cDNA) ولتضخيم الكميات الضئيلة من المكتبة المُنتجة. يؤثر هذا سلبًا على تنوع المكتبة نتيجة فقدان النسخ منخفضة الوفرة بسبب التأثيرات العشوائية والتحيز في تفاعل البوليميراز المتسلسل أثناء تضخيم الحمض النووي المكمل، بالإضافة إلى توليد نسخ مكررة من تفاعل البوليميراز المتسلسل أثناء تضخيم المكتبة. علاوة على ذلك، غالبًا ما تُدخل أنظمة تفاعل البوليميراز المتسلسل هذه تحيزًا في محتوى الجوانين والسيتوزين (GC) وتحيزًا في الطول، مما قد يُصعّب تسلسل النسخ الغنية بالجوانين والسيتوزين أو الطويلة. في المقابل، تعتمد مجموعة QIAseq Single Cell RNA Library Kit UDI على إنزيم REPLI-g لإجراء تفاعل تضخيم الإزاحة المتعددة (MDA) عالي الكفاءة لتضخيم الحمض النووي المكمل. ينتج عن هذا كمية كافية من المواد بحيث لا يكون تضخيم المكتبة ضروريًا، مما يوفر سير عمل خاليًا تمامًا من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) والذي يقضي على النسخ المكررة لتفاعل البوليميراز المتسلسل ويزيد من عدد النسخ المكتشفة، بما في ذلك النسخ الطويلة مثل lncRNAs.

مبدأ

تعتمد هذه المجموعة على ثلاث تقنيات رئيسية لتمكين تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) بدون تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من الخلايا المفردة، أو مجموعات الخلايا، أو كميات قليلة من الحمض النووي الريبوزي. بعد تحلل الخلايا، وتحلل الحمض النووي الجينومي (gDNA)، والنسخ العكسي، يتم ربط الحمض النووي التكميلي (cDNA) لتكوين قالب طويل يمكن تضخيمه في تفاعل تضخيم متعدد الإزاحة (MDA). يتم ذلك باستخدام بوليميراز الحمض النووي REPLI-g SensiPhi، الذي ينتج كميات بالمايكروغرام من الحمض النووي التكميلي الطويل. ثم يتم تجزئة هذا الحمض النووي التكميلي الطويل عشوائيًا باستخدام تقنية FX من QIAGEN إلى أجزاء قصيرة مناسبة للتسلسل. أخيرًا، تعمل عملية تحضير مكتبة أحادية الأنبوب عالية الكفاءة على تجميع هذه الأجزاء في مكتبات تسلسل الجيل التالي (NGS) التي يمكن تسلسلها مباشرةً، دون الحاجة إلى تضخيم المكتبة أو تحيز إضافي لتفاعل البوليميراز المتسلسل. وبذلك، توفر تقنية تضخيم متعدد الإزاحة عالية الإنتاجية، والتجزئة العشوائية وغير المتحيزة بتقنية FX، وبناء المكتبة أحادي الأنبوب بكفاءة عالية، مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبوزي المعقدة للغاية بدون تفاعل البوليميراز المتسلسل من الخلايا المفردة في غضون 5.5 ساعات فقط.

إجراء

مجموعة QIAseq Single Cell RNA Library Kit UDI هي حل متكامل لتحويل الخلايا إلى مكتبات RNA-seq، حيث تُنتج مكتبات RNA-seq من خلايا حقيقية النواة مفردة أو من كميات ضئيلة جدًا (بيكوغرام) من الحمض النووي الريبوزي النقي. تحتوي المجموعة على كواشف لتحليل الخلايا المفردة المعزولة أو مجموعات الخلايا بكفاءة عالية من منصات فرز الخلايا أو عزلها الشائعة. بعد التحليل، يتحلل الحمض النووي الجينومي وتُجرى عملية النسخ العكسي. يمكن بدء هذا التفاعل باستخدام بادئات oligo-dT لإثراء الحمض النووي الريبوزي متعدد الأدينين، أو بادئات عشوائية مع QIAseq FastSelect لتغطية كاملة للمستنسخات دون الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي، أو يمكنك استخدام بادئاتك الخاصة لإثراء جينومات الحمض النووي الريبوزي الصغيرة المحددة، مثل جينوم فيروسي، لأغراض التسلسل. بعد النسخ العكسي وتخليق السلسلة الثانية، تُنتج خطوة الربط قالب cDNA طويل مزدوج السلسلة، والذي يُضخّم عبر تقنية MDA باستخدام بوليميراز الحمض النووي REPLI-g SensiPhi عالي الدقة والتصحيح. ينتج عن هذه العملية كميات ضئيلة من الحمض النووي التكميلي المُضخّم (cDNA)، يمكن تخزين بعضها لاستخدامها لاحقًا أو لإجراء اختبارات تأكيدية. يُجزّأ الحمض النووي التكميلي المُضخّم باستخدام تفاعل التجزئة الأنزيمي FX من QIAGEN، مما يُنتج قطعًا مُدرجة متوافقة مع أطوال قراءات التسلسل الشائعة. بتغيير ظروف التجزئة، يُمكن تعديل حجم القطعة المُدرجة وفقًا للتفضيلات الشخصية. يُغني تفاعل التضخيم القابل للتكرار عن الحاجة إلى تحديد كمية الحمض النووي التكميلي قبل التجزئة. يُصقل الحمض النووي المُجزّأ من الأطراف ويُخضع لتفاعل ربط عالي الكفاءة باستخدام مجموعات QIAseq Unique Dual-Index Y-Adapter المُرفقة. لا حاجة لتضخيم المكتبة باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وبالتالي يتم تجنب إنتاج نسخ مُكررة من تفاعل البوليميراز المتسلسل، ويبقى تنوع المكتبة عاليًا.

التطبيقات

- تحليل التعبير الجيني
- الكشف عن نسخ mRNA/lncRNAs
- علم الجينوم الفيروسي وعلم النسخ