شركة كياجين، 19160، يوراسيل-إن-جليكوزيلاز (2 × 1 مل)

٥٠ تحضيرًا: للاستخدام مع مجموعات QIAGEN DNA FFPE UNG

سمات

- استخلاص عالي للحمض النووي القابل للتضخيم
- إزالة البارافين بدون استخدام الزيلين أو المذيبات المماثلة
- اليوراسيل (السيتوزين منزوع الأمين) - خطوة إزالة الشوائب باستخدام إنزيم يوراسيل-إن-جليكوزيلاز (UNG) أثناء استخلاص الحمض النووي
- حمض نووي جاهز للاستخدام في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (dPCR)، وتسلسل الجيل التالي (NGS)

تفاصيل المنتج

قم بزيادة استخلاص الحمض النووي عالي الجودة من أنسجة FFPE باستخدام بروتوكول إزالة البارافين الخالي من الزيلين، والذي لا يتطلب غسلًا، وبروتوكول التحلل المزدوج، وتقنية عمود الدوران UCP (الإنتاج فائق النظافة).

قم بإزالة تحولات C→U للأحماض النووية باستخدام هضم UNG الاختياري في المجموعات لتحسين الحمض النووي المستخلص لتحليل NGS.

يمكنك أيضًا أتمتة بروتوكولات QIAamp DNA FFPE Advanced على جهاز QIAcube Connect.

أداء

إحدى خصائص قياس كمية الحمض النووي في عينات FFPE هي أن الطرق المختلفة ستعطي نتائج مختلفة، وأن القيم العالية للأشعة فوق البنفسجية المرئية أو القيم الفلورية لا تعني بالضرورة أداءً جيدًا لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).

نظرًا لأن تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي، أو تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR)، هو أحد أكثر التطبيقات اللاحقة شيوعًا لـ FFPE، فإن مجموعات QIAamp DNA FFPE Advanced Kits مُحسَّنة لـ qPCR.

بغض النظر عن القيم التي تم الحصول عليها في قياسات الأشعة فوق البنفسجية المرئية أو قياسات الفلورة، أظهرت مجموعات QIAamp DNA FFPE Advanced Kits باستمرار أداءً أفضل في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في ظل التحديد الكمي لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) مقارنة بالمنتجات الأخرى التي تم اختبارها (انظر الشكل "محسّن لأداء تفاعل البوليميراز المتسلسل").

كما أن مجموعة QIAamp DNA FFPE Advanced UNG مناسبة تمامًا لتنقية الحمض النووي لاستخدامه في تحليل NGS، لأنها تعالج مشكلة التحولات الاصطناعية C→T/G→A، والتي تحدث بشكل شائع في مواد FFPE بسبب إزالة الأمين من السيتوزين (انظر "التحولات الاصطناعية C→T/G→A").

من خلال هضم اليوراسيل القائم على UNG أثناء عزل الحمض النووي، يقلل بروتوكول QIAamp DNA FFPE Advanced UNG من التقارير الإيجابية الكاذبة لمتغيرات النوكليوتيدات المفردة (SNVs) في NGS (انظر الشكل "انخفاض كبير في التحولات C→T | G→A المصطنعة").

مبدأ

- انخفاض الإنتاجية بسبب محدودية المواد المدخلة وتلف الحمض النووي
- الحمض النووي غير القابل للتضخيم بسبب الروابط المتشابكة الناتجة عن الفورمالين
- يمكن أن تتسبب شوائب السيتوزين منزوع الأمين في نتائج خاطئة في تحليلات الطفرات باستخدام تقنية التسلسل الجيني من الجيل التالي (NGS).

- من خلال تطبيق إجراء تحلل ثنائي الخطوات، مما يضمن استخلاص كمية كبيرة من الحمض النووي حتى من العينات التي يصعب تحللها
- من خلال استبدال إزالة البارافين باستخدام المذيبات بمحلول إزالة البارافين، مما يلغي جميع خطوات الغسل قبل التحلل الأولي، وبالتالي يقلل من خطر فقدان كمية العينة الشحيحة

توجد ثلاثة تحديات رئيسية في تحضير الحمض النووي من أنسجة مثبتة بالفورمالين ومضمنة في البارافين:

تعمل مجموعات QIAamp DNA FFPE المتقدمة على زيادة إنتاج الحمض النووي من كميات محدودة من العينات بطريقتين:

يؤدي إزالة الروابط المتشابكة إلى زيادة استعادة الحمض النووي القابل للتضخيم (انظر الشكل "محسن لأداء تفاعل البوليميراز المتسلسل").

تعمل المعالجة الاختيارية باستخدام إنزيم UNG قبل عملية التحلل الثانية على إزالة القطع الأثرية من السيتوزين منزوع الأمين، مما يجعل الحمض النووي مناسبًا بشكل خاص لتحليل NGS (انظر الجدول "مُهيأ لـ NGS"، بالإضافة إلى الأشكال "نتائج dPCR و NGS الموثوقة" و "انخفاض كبير في التحولات C→T | G→A الأثرية").

إجراء

يتكون إجراء QIAamp DNA FFPE Advanced من خطوة إزالة البارافين المبسطة، وخطوتين للتحلل مع إزالة التشابك بينهما وإزالة القطع الأثرية الاختيارية، وخطوات الربط والغسل والإذابة القياسية (انظر الشكل "سير عمل QIAamp DNA FFPE Advanced").

التطبيقات

يمكن استخدام الحمض النووي المستخلص من عينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين (FFPE) باستخدام مجموعات QIAamp DNA FFPE Advanced Kits على الفور لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي (dPCR) أو التسلسل الجيني من الجيل التالي (NGS)، أو يمكن تخزينه عند درجة حرارة تتراوح من -30 إلى -15 درجة مئوية.