شركة كياجين، 203146، مجموعة خلط AllTaq Master Mix Kit (2500) icon_0368_ls_gen_eco_friendly-s

لتضخيم 2500 × 20 ميكرولتر من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR): 10 × 1.25 مل من مزيج AllTaq الرئيسي (4x)، 5 × 200 ميكرولتر من مُتتبع القالب (25x)، 10 × 50 ميكرولتر من مُتتبع المزيج الرئيسي (125x)، 20 × 1.9 مل من الماء الخالي من إنزيم RNase

سمات

- نظام تحكم بسيط ومرئي في عملية السحب بالماصة، بالإضافة إلى أصباغ تتبع الجل لمراقبة نجاح العملية
- نفس البروتوكول لمدة 45 دقيقة لجميع الأهداف بما في ذلك الأهداف الغنية بالـ GC والأهداف الطويلة التي يصل طولها إلى 9 كيلوبايت
- تتيح الكيمياء متعددة الاستخدامات إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل المزدوج وإدراج الضوابط الداخلية
- مزيج رئيسي مركز 4 مرات وثبات ممتاز في درجة حرارة الغرفة
- توفر الكيمياء المحمية بطبقة واقية والتي تعمل بنظام بدء التشغيل الساخن دقة وحساسية فائقتين

تفاصيل المنتج

توفر مجموعة AllTaq Master Mix Kit ومجموعة AllTaq PCR Core Kit صيغة ملائمة لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عالي الحساسية والنوعية باستخدام أي قالب DNA أو cDNA. تُناسب كلتا المجموعتين جميع تطبيقات تفاعل البوليميراز المتسلسل، وتوفران الميزات التالية: أدوات تحكم مرئية في عملية المعايرة، وأصباغ تحميل وتتبع الجل، وبروتوكول دورات فائق السرعة، وثبات عالٍ في درجة حرارة الغرفة أثناء وبعد تحضير التفاعل، وصيغة مزيج رئيسي مُركّز أربع مرات، مما يسمح باستخدام حجم عينة أكبر.

هل ترغب بتجربة محلول AllTaq Master Mix Kit لأول مرة؟ اطلب عرض سعر لمجموعة تجريبية.

هل ترغب بتجربة محلول AllTaq PCR Core Kit لأول مرة؟ اطلب عرض سعر لمجموعة تجريبية.

أداء

تُسهّل التركيبة المبتكرة لمزيج AllTaq الرئيسي ومحلول AllTaq PCR Buffer تضخيم منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المحددة، وتحقق نتائج ناجحة من المحاولة الأولى، باستخدام نفس البروتوكول لجميع الأهداف. خلال مرحلة التلدين، يسمح المحلول بنسبة عالية من ارتباط البادئات النوعية إلى غير النوعية (انظر الشكل: محلول PCR Buffer). تم تكييف تركيبة المحلول المُختبرة مع ظروف دورات التضخيم فائقة السرعة، وتوفر في الوقت نفسه ظروف تلدين صارمة للبادئات ضمن نطاق واسع من درجات حرارة التلدين. كما يضمن محلول AllTaq PCR Buffer إمكانيات مثالية لتضخيم الحمض النووي المزدوج. لا يتطلب الأمر تحسين تفاعل PCR عن طريق تغيير درجة حرارة التلدين (انظر الشكل: لا حاجة لتحسين درجة حرارة التلدين) أو تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg2+). تُمكّن هذه التركيبة الكيميائية متعددة الاستخدامات من تضخيم أهداف طويلة تصل إلى 9 كيلوبايت، بالإضافة إلى تضخيم الحمض النووي المزدوج، مما يوفر تخطيطًا مرنًا لسير العمل باستخدام نفس مجموعة PCR. يُسهّل محلول Q المُقدّم في مجموعة AllTaq PCR Core Kit تضخيم البنى الثانوية المعقدة، مثل القوالب الغنية بالـ GC. تمنع آلية البدء الساخن المحمية بالحماية (انظر الشكل مبدأ آلية البدء الساخن AllTaq) تسرب PCR المبكر، مما يضمن خصوصية وحساسية فائقة وصولاً إلى جزيء هدف واحد (انظر الشكل الكشف عن نسخة واحدة).

مبدأ

توفر مجموعة AllTaq Master Mix تركيبةً سهلة الاستخدام وجاهزة للاستخدام. أما مجموعة AllTaq PCR Core Kit، فتتضمن إنزيم AllTaq DNA Polymerase، ومحلول AllTaq PCR buffer، وdNTPs، وMgCl₂، ومحلول Q في أنابيب منفصلة، ​​وذلك في حال الرغبة بتحسين بروتوكول تفاعل البوليميراز المتسلسل (انظر الشكل: تضخيم أجزاء PCR الطويلة). وتحتوي كلتا المجموعتين على مُتتبّع Master Mix باللون البرتقالي ومُتتبّع Template باللون الأزرق في قوارير منفصلة للاستخدام الاختياري. عند درجات الحرارة المنخفضة، يبقى إنزيم AllTaq DNA Polymerase في حالة غير نشطة بفضل جسم مضاد وجزيء حماية جديد، مما يُثبّت المُركّب (انظر الشكل: مبدأ آلية بدء التشغيل الساخن لـ AllTaq). يُحسّن هذا من دقة بدء التشغيل الساخن ويمنع أي نشاط إنزيمي في درجة حرارة الغرفة، مما يسمح بإعداد التفاعل دون الحاجة إلى الثلج، ويُسهّل التشغيل الآلي. يتم تنشيط الإنزيم بالكامل بعد خطوة الحضانة لمدة دقيقتين عند 95 درجة مئوية، ويبدأ التضخيم بدقة عالية من الدورة الأولى. تُزيل عملية البدء الساخن التمديد الناتج عن البادئات غير المُلتحمة بشكل نوعي وثنائيات البادئات من الدورة الأولى، مما يضمن تفاعل PCR عالي النوعية وقابل للتكرار. يُسهّل مزيج AllTaq PCR الرئيسي المبتكر ومحلول AllTaq Buffer ظروف دورات فائقة السرعة، ويُوفران في الوقت نفسه ظروفًا صارمة لالتحام البادئات عبر نطاق واسع من درجات حرارة الالتحام. كما يضمنان أيضًا إمكانيات مثالية للثنائيات. لا يتطلب الأمر تحسين تفاعل PCR عن طريق تغيير درجة حرارة الالتحام أو تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺). تسمح الصبغات الزرقاء والبرتقالية في مُتتبع قالب PCR ومُتتبع مزيج PCR الرئيسي، على التوالي، بالتتبع البصري للعينات المسحوبة بالماصة أثناء إعداد تفاعل PCR، مما يمنع حدوث الأخطاء. عند إضافة القالب الأزرق إلى مزيج PCR الرئيسي البرتقالي، يتغير اللون إلى الأخضر، مما يؤكد إضافة العينة (انظر الشكل: التحكم البصري في السحب بالماصة). استخدام هذه المُتتبعات اختياري. يمكن تحميل التفاعلات مباشرةً على هلامات الأغاروز بعد انتهاء الدورات. يسمح كل صبغ متتبع بمراقبة عملية التحميل والتتبع الفعال لعملية الفصل الكهربائي اللاحقة (انظر الشكل أصباغ التتبع المتكاملة).

إجراء

توفر مجموعة AllTaq Master Mix تركيبة مركزة 4x جاهزة للاستخدام، مما يسمح بإدخال كمية كبيرة من القالب لتعزيز الحساسية. تحتوي مجموعة AllTaq PCR Core Kit على بوليميراز الحمض النووي AllTaq، ومحلول منظم PCR، وdNTPs، وMgCl2، ومحلول Q في أنابيب منفصلة، ​​في حال الرغبة بتحسين بروتوكول PCR. يمكن إضافة صبغة التتبع البرتقالية إلى مزيج Master Mix أو محلول منظم PCR. عند إضافة قالب مصبوغ بصبغة التتبع الزرقاء إلى مزيج Master Mix، يتغير لون المحلول من البرتقالي إلى الأخضر، مما يوفر مؤشرًا مرئيًا على صحة عملية السحب بالماصة وإعداد التفاعل (انظر الشكل: إجراء PCR). تسمح أصباغ التتبع بالتحميل المباشر على هلام الأغاروز بعد PCR وتتبع فعال لعملية الفصل الكهربائي اللاحقة. تعمل الأصباغ عند حوالي 50 زوجًا قاعديًا (برتقالي) و4000 زوج قاعدي (أزرق) على هلام أغاروز بنسبة 1% (انظر الشكل: أصباغ التتبع المتكاملة). يُتيح نظام المحلول المنظم متعدد الاستخدامات إجراء تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) فائق السرعة، في غضون 45 دقيقة تقريبًا، باستخدام نفس البروتوكول المُستخدم في أي تفاعل PCR قياسي أو تفاعل PCR مزدوج. كما يُوفر بروتوكول دورات للقوالب الطويلة، التي يتراوح طولها بين 1 و9 كيلوبايت. وتُمكّن آلية بدء التشغيل الساخن المحمية من إتمام إعداد التفاعل بالكامل في درجة حرارة الغرفة، مما يُغني عن استخدام الثلج ويُتيح استخدام الماصة الآلية. بعد إعداد التفاعل، يُمكن ترك العينات في درجة حرارة الغرفة لأكثر من 3 أيام قبل بدء دورات تفاعل PCR. علاوة على ذلك، يتميز المزيج الرئيسي بثباته العالي، مما يمنع تحلله أثناء الاستخدام ويُتيح تخزينه في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر. تحتوي مجموعة AllTaq PCR Core Kit على محلول Q-Solution الذي يُمكن إضافته اختياريًا. يُسهّل محلول Q-Solution تضخيم الأهداف الصعبة عن طريق تعديل سلوك ذوبان الأحماض النووية (مثل القوالب ذات البنية الثانوية المعقدة أو الغنية بـ GC). ولتبسيط إجراءات عمل تفاعل PCR بشكل أكبر، نوصي باستخدام جهاز QIAgility لإعداد التفاعل آليًا وتحليل تفاعل PCR على نظام QIAxcel Advanced.