شركة كياجين، 203209، إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq (25000)

١٠٠ × ٢٥٠ وحدة من بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq، ١٠٠ × ١.٢ مل من مجموعة محلول HotStarTaq، ١٠٠ × ٢.٠ مل من محلول Q، ١٠٠ × ١.٢ مل من كلوريد المغنيسيوم

سمات

- الحد الأدنى من متطلبات التحسين
- خصوصية عالية في تفاعل البوليميراز المتسلسل
- سهولة الاستخدام والإعداد في درجة حرارة الغرفة

أداء

بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq: إنزيم بدء التشغيل الساخن من المورد A II
تضخيم نوعي: ++
الحد الأدنى من تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل: ++
سهل الاستخدام: ++

تخضع كل دفعة من بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq لمجموعة شاملة من اختبارات مراقبة الجودة، بما في ذلك اختبار دقيق لتحديد نوعية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وقابلية تكراره، حيث يتم تضخيم الأهداف ذات النسخ المنخفضة. وقد تفوق بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq على مجموعات الاختبار من موردين آخرين، ويضمن نوعية عالية وأداءً فائقًا في تفاعل البوليميراز المتسلسل ذي البداية الساخنة (انظر الشكلين "نوعية أعلى مع أنظمة البادئات والقوالب المختلفة" و"أداء فائق" والجدول). يضمن محلول PCR المبتكر المرفق مع المجموعة النوعية في نطاق واسع من ظروف تفاعل البوليميراز المتسلسل، مما يقلل الحاجة إلى التحسين (انظر الشكل "تحمل درجات الحرارة المتغيرة وتركيزات المغنيسيوم"). يمكن تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل غير الأمثل باستخدام محلول Q-Solution، المرفق أيضًا مع المجموعة (انظر الشكل "تضخيم القوالب الصعبة"). تضمن هذه المكونات مجتمعة تضخيمًا نوعيًا في مجموعة من التطبيقات (انظر الشكل "تأثير البداية الساخنة على أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي" و"تفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الحساسية للخلايا المفردة").

مواصفات بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq

التركيز: 5 وحدات/ميكرولتر، إنزيم مُعاد التركيب: نعم، نظائر الركيزة: dNTP، ddNTP، dUTP، بيوتين-11-dUTP، DIG-11-dUTP، فلورسنت-dNTP/ddNTP، معدل التمديد: 2-4 كيلوبايت/دقيقة عند 72 درجة مئوية، نصف العمر: 10 دقائق عند 97 درجة مئوية؛ 60 دقيقة عند 94 درجة مئوية، كفاءة التضخيم: ≥10⁵ ضعف، نشاط إكسونوكلياز 5'–>3': نعم، إضافة إضافية A: نعم، نشاط إكسونوكلياز 3'–>5': لا، نوكليازات ملوثة: لا، RNases ملوثة: لا، بروتيازات ملوثة: لا، نشاط التحضير الذاتي: لا

مبدأ

يوفر إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase، وهو شكل معدل من إنزيم Taq DNA Polymerase، دقة عالية في تفاعل البلمرة المتسلسل ذي البداية الساخنة. تتضمن المجموعة محلولًا مبتكرًا لتفاعل البلمرة المتسلسل ثنائي الكاتيونات، ومحلول Q-Solution، وكلوريد المغنيسيوم (MgCl₂).

بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq

يُزوَّد إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq في حالة غير نشطة، ولا يمتلك أي نشاط بوليميراز في درجات الحرارة المحيطة. يمنع هذا استطالة البادئات غير المُرتبطة بشكل نوعي، وثنائيات البادئات المتكونة في درجات حرارة منخفضة أثناء إعداد تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ودورة PCR الأولية (انظر الشكلين "أداء فائق في تفاعل PCR ذي البداية الساخنة" و"نوعية أعلى مع أنظمة البادئات والقوالب المختلفة"). يُنشَّط إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq بحضانة لمدة 15 دقيقة عند 95 درجة مئوية، ويمكن دمج هذه العملية في أي برنامج لجهاز التدوير الحراري الحالي.

محلول QIAGEN PCR

يحافظ محلول QIAGEN PCR Buffer على التضخيم النوعي في كل دورة من دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من خلال تعزيز نسبة عالية من ارتباط البادئات النوعية إلى غير النوعية خلال مرحلة التلدين في كل دورة (انظر الشكل "زيادة نوعية تلدين البادئات"). وبفضل تركيبة متوازنة فريدة من كلوريد البوتاسيوم (KCl) وكبريتات الأمونيوم (NH₄)₂SO₄، يوفر هذا المحلول ظروف تلدين صارمة للبادئات ضمن نطاق أوسع من درجات حرارة التلدين وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) مقارنةً بمحاليل PCR التقليدية. ولذلك، غالبًا ما يكون تحسين تفاعل PCR عن طريق تغيير درجة حرارة التلدين أو تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) ضئيلاً أو غير ضروري (انظر الشكل "تحمل تغيرات درجة الحرارة وتركيزات المغنيسيوم").

كيو-سوليوشن

يُرفق مع إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq مُضاف Q-Solution، وهو مُضاف مبتكر لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) يُسهّل تضخيم القوالب الصعبة عن طريق تعديل سلوك انصهار الحمض النووي. يُحسّن هذا الكاشف الفريد تفاعل PCR غير الأمثل الناتج عن القوالب ذات البنية الثانوية المعقدة أو القوالب الغنية بالـ GC (انظر الشكل "تضخيم القوالب الصعبة"). على عكس مُضافات PCR الأخرى الشائعة الاستخدام، مثل DMSO، يُستخدم Q-Solution بتركيز واحد فقط، وهو غير سام، ويضمن نقاء تفاعل PCR. لا يؤثر إضافة Q-Solution إلى تفاعل PCR على دقة التفاعل.

التطبيقات

- قوالب جينومية معقدة
- قوالب الحمض النووي التكميلي المعقدة (مثل RT-PCR)
- أهداف ذات عدد نسخ منخفض للغاية (مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي الخلية)
- تفاعلات باستخدام أزواج متعددة من البادئات

يُعد إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase مناسبًا لمجموعة واسعة من التطبيقات، بما في ذلك التطبيقات الصعبة، مثل تضخيم: