شركة كياجين، 203445، مجموعة هوت ستار تاك ماستر ميكس (1000 وحدة)

12 × 0.85 مل من مزيج HotStarTaq الرئيسي (يحتوي على 1000 وحدة من بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq، ومحلول منظم لتفاعل البوليميراز المتسلسل مع 3 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم، و400 ميكرومولار من كل نيوكليوتيد ثلاثي الفوسفات) و8 × 1.7 مل من الماء الخالي من إنزيم RNase

سمات

- دقة عالية في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) دون الحاجة إلى تحسين
- سهولة تحضير التفاعل في درجة حرارة الغرفة
- يقلل تنسيق المزيج الرئيسي الجاهز للاستخدام من خطوات استخدام الماصة

أداء

بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq: إنزيم بدء التشغيل الساخن من المورد A II
تضخيم نوعي: ++
الحد الأدنى من تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل: ++
سهل الاستخدام: ++

تخضع كل دفعة من مجموعة HotStarTaq Master Mix Kit لمجموعة شاملة من اختبارات مراقبة الجودة، بما في ذلك اختبار دقيق لخصوصية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وقابليته للتكرار، حيث يتم تضخيم الأهداف ذات النسخ المنخفضة. وقد تفوقت مجموعة HotStarTaq Master Mix Kit على المجموعات المختبرة من موردين آخرين، وتضمن خصوصية عالية وأداءً فائقًا في تفاعل البوليميراز المتسلسل ذي البداية الساخنة (انظر الشكلين "خصوصية أعلى مع أنظمة البادئات والقوالب المختلفة" و"أداء فائق" والجدول). ويضمن محلول PCR المبتكر المرفق مع المجموعة الخصوصية في نطاق واسع من ظروف تفاعل البوليميراز المتسلسل، مما يقلل الحاجة إلى التحسين (انظر الشكل "تحمل درجات الحرارة المتغيرة وتركيزات المغنيسيوم").

بفضل الجمع بين الخصوصية العالية وسهولة الاستخدام، يُعدّ طقم HotStarTaq Master Mix مناسبًا للاستخدام مع قوالب الجينوم المعقدة أو قوالب الحمض النووي المكمل (انظر الشكل "تأثير بدء التشغيل الساخن على أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي")، وأزواج البادئات المتعددة (انظر الشكل "التضخيم النوعي في تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد")، والقوالب المعزولة من مصادر صعبة أو أهداف ذات نسخ منخفضة جدًا (انظر الشكل "تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي الخلية عالي الحساسية"). كما أنه مناسب لمشاريع مثل الفحص الجيني، حيث يتم تضخيم أعداد كبيرة من العينات.

مواصفات بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq

التركيز: 5 وحدات/ميكرولتر، إنزيم مُعاد التركيب: نعم، نظائر الركيزة: dNTP، ddNTP، dUTP، بيوتين-11-dUTP، DIG-11-dUTP، فلورسنت-dNTP/ddNTP، معدل التمديد: 2-4 كيلوبايت/دقيقة عند 72 درجة مئوية، نصف العمر: 10 دقائق عند 97 درجة مئوية؛ 60 دقيقة عند 94 درجة مئوية، كفاءة التضخيم: ≥10 أضعاف، نشاط إكسونوكلياز 5'–>3': نعم، إضافة إضافية A: نعم، نشاط إكسونوكلياز 3'–>5': لا، نوكليازات ملوثة: لا، RNases ملوثة: لا، بروتيازات ملوثة: لا، نشاط التحضير الذاتي: لا >

مبدأ

مزيج HotStarTaq Master Mix هو مزيج جاهز للاستخدام يتكون من إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase، ومحلول QIAGEN PCR Buffer، و dNTPs. يوفر إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase، وهو شكل معدل من إنزيم Taq DNA Polymerase، دقة عالية في تفاعل البوليميراز المتسلسل ذي البداية الساخنة.

بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq

يُزوَّد إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq في حالة غير نشطة، ولا يمتلك أي نشاط بوليميراز في درجات الحرارة المحيطة. يمنع هذا استطالة البادئات غير المُرتبطة بشكل نوعي، وثنائيات البادئات المتكونة في درجات حرارة منخفضة أثناء إعداد تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ودورة PCR الأولية (انظر الشكلين "أداء فائق في تفاعل PCR ذي البداية الساخنة" و"نوعية أعلى مع أنظمة البادئات والقوالب المختلفة"). يُنشَّط إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq بحضانة لمدة 15 دقيقة عند 95 درجة مئوية، ويمكن دمج هذه العملية في أي برنامج لجهاز التدوير الحراري الحالي.

محلول QIAGEN PCR

يحافظ محلول QIAGEN PCR Buffer على التضخيم النوعي في كل دورة من دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من خلال تعزيز نسبة عالية من ارتباط البادئات النوعية إلى غير النوعية خلال مرحلة التلدين في كل دورة (انظر الشكل "زيادة نوعية تلدين البادئات"). وبفضل تركيبة متوازنة فريدة من كلوريد البوتاسيوم (KCl) وكبريتات الأمونيوم (NH₄)₂SO₄، يوفر هذا المحلول ظروف تلدين صارمة للبادئات ضمن نطاق أوسع من درجات حرارة التلدين وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) مقارنةً بمحاليل PCR التقليدية. غالبًا ما يكون تحسين تفاعل PCR عن طريق تغيير درجة حرارة التلدين أو تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) ضئيلاً أو غير ضروري (انظر الشكل "تحمل درجات الحرارة المتغيرة وتركيزات المغنيسيوم").

التطبيقات

- قوالب جينومية معقدة
- قوالب الحمض النووي التكميلي المعقدة (مثل RT-PCR)
- أهداف ذات عدد نسخ منخفض للغاية (مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي الخلية)
- تفاعلات باستخدام أزواج متعددة من البادئات

تُعد مجموعة HotStarTaq Master Mix Kit مناسبة للغاية لمجموعة واسعة من التطبيقات، بما في ذلك التطبيقات الصعبة مثل تضخيم: