شركة كياجين، 203605، إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus (1000)

1000 وحدة من بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus، ومحلول منظم لتفاعل البوليميراز المتسلسل بتركيز 10x، ومحلول منظم لتفاعل البوليميراز المتسلسل CoralLoad بتركيز 10x، ومحلول Q بتركيز 5x، و25 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم.

سمات

- خصوصية عالية في تفاعل البوليميراز المتسلسل مع الحد الأدنى من التحسين
- وقت تنشيط سريع للإنزيم خلال 5 دقائق
- محلول منظم جاهز للاستخدام في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لسهولة وسرعة التعامل

أداء

بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus: بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq
التضخيم النوعي: ++
الحد الأدنى من تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل: ++
سهل الاستخدام: +++
سرعة التفعيل: ++

تخضع كل دفعة من إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase لمجموعة شاملة من اختبارات مراقبة الجودة، بما في ذلك اختبار دقيق لتحديد نوعية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وقابلية تكراره، حيث يتم تضخيم الأهداف ذات النسخ المنخفضة. وقد تفوق إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase على مجموعات الاختبار من موردين آخرين، ويضمن نوعية عالية وأداءً فائقًا في تفاعل البوليميراز المتسلسل ذي البداية الساخنة (انظر الشكلين "أعلى نوعية" و"نوعية أعلى مع أنظمة البادئات والقوالب المختلفة"، والجدول). يضمن محلول PCR المبتكر المرفق مع المجموعة النوعية في نطاق واسع من ظروف تفاعل البوليميراز المتسلسل، مما يقلل الحاجة إلى التحسين. ويمكن تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل غير الأمثل باستخدام محلول Q-Solution، المرفق أيضًا مع المجموعة (انظر الشكل "تضخيم القوالب الصعبة"). وتضمن هذه المكونات مجتمعة تضخيمًا نوعيًا في مجموعة من التطبيقات (انظر الشكل "تأثير البداية الساخنة على أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي" و"تفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الحساسية للخلايا المفردة").

مواصفات بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus

التركيز: 5 وحدات/ميكرولتر، إنزيم مُعاد التركيب: نعم، نظائر الركيزة: dNTP، ddNTP، dUTP، بيوتين-11-dUTP، DIG-11-dUTP، فلورسنت-dNTP/ddNTP، معدل التمديد: 2-4 كيلوبايت/دقيقة عند 72 درجة مئوية، نصف العمر: 10 دقائق عند 97 درجة مئوية؛ 60 دقيقة عند 94 درجة مئوية، كفاءة التضخيم: ≥10⁵ ضعف، نشاط إكسونوكلياز 5'–>3': نعم، إضافة إضافية A: نعم، نشاط إكسونوكلياز 3'–>5': لا، نوكليازات ملوثة: لا، RNases ملوثة: لا، بروتيازات ملوثة: لا، نشاط التحضير الذاتي: لا

مبدأ

يوفر إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase أداءً لا مثيل له لإنزيم HotStarTaq DNA Polymerase مع وقت تنشيط أقصر يبلغ 5 دقائق فقط.

يُزوَّد إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase، وهو شكل مُعدَّل من إنزيم QIAGEN Taq DNA Polymerase، في حالة غير نشطة، أي أنه لا يمتلك أي نشاط بوليميرازي في درجات الحرارة المحيطة. يمنع هذا التمديد غير النوعي للبادئات المُلتحمة وثنائيات البادئات المُتكوِّنة في درجات الحرارة المنخفضة أثناء إعداد تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ودورة PCR الأولية (انظر الشكلين "أعلى نوعية" و"نوعية أعلى مع أنظمة بادئات-قوالب مختلفة"). يُنشَّط إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase بحضانة قصيرة لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية، ويمكن دمج هذه العملية بسهولة في أي برنامج لجهاز التدوير الحراري الحالي.

محلول QIAGEN PCR

يحافظ محلول QIAGEN PCR Buffer على التضخيم النوعي في كل دورة من دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من خلال تعزيز نسبة عالية من ارتباط البادئات النوعية إلى غير النوعية خلال مرحلة التلدين في كل دورة (انظر الشكل "زيادة نوعية تلدين البادئات"). وبفضل تركيبة متوازنة فريدة من كلوريد البوتاسيوم (KCl) وكبريتات الأمونيوم (NH₄)₂SO₄، يوفر هذا المحلول ظروف تلدين دقيقة للبادئات ضمن نطاق أوسع من درجات حرارة التلدين وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) مقارنةً بمحاليل PCR التقليدية. ولذلك، غالبًا ما يكون تحسين تفاعل PCR عن طريق تغيير درجة حرارة التلدين أو تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) ضئيلاً أو غير ضروري.

محلول CoralLoad PCR

يُزوَّد إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus بمحلول CoralLoad PCR، الذي يتميز بجميع مزايا محلول QIAGEN PCR، بالإضافة إلى إمكانية استخدامه لتحميل نواتج تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) مباشرةً على هلام الأغاروز دون الحاجة إلى إضافة محلول تحميل. يوفر محلول CoralLoad PCR نفس الخصوصية العالية لتفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) والحد الأدنى من تحسين التفاعل الذي يوفره محلول QIAGEN PCR التقليدي. علاوة على ذلك، يحتوي على صبغتين دالتين - صبغة برتقالية وأخرى حمراء - تُسهِّلان تقدير مسافة هجرة الحمض النووي وتحسين وقت تشغيل هلام الأغاروز (انظر الشكل "محلول CoralLoad PCR"). يضمن المحلول رؤيةً أوضح عند استخدام الماصة، ويتيح تحميل نواتج تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) مباشرةً على الهلام، مما يُحسِّن سهولة الاستخدام.

كيو-سوليوشن

يُرفق مع إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase مُضاف Q-Solution، وهو مُضاف مبتكر لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) يُسهّل تضخيم القوالب الصعبة عن طريق تعديل سلوك انصهار الحمض النووي. يُحسّن هذا الكاشف الفريد تفاعل PCR غير الأمثل الناتج عن القوالب ذات البنية الثانوية العالية أو القوالب الغنية بالـ GC (انظر الشكل "تضخيم القوالب الصعبة"). على عكس مُضافات PCR الأخرى الشائعة الاستخدام مثل DMSO، يُستخدم Q-Solution بتركيز واحد فقط، وهو غير سام، ويضمن نقاء تفاعل PCR. لا تُؤثر إضافة Q-Solution إلى تفاعل PCR على دقة التفاعل.

التطبيقات

- قوالب جينومية معقدة
- قوالب الحمض النووي التكميلي المعقدة (مثل RT-PCR)
- أهداف ذات عدد نسخ منخفض للغاية (مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي الخلية)
- تفاعلات باستخدام أزواج متعددة من البادئات

يُعد إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase مناسبًا للغاية لمجموعة واسعة من التطبيقات، بما في ذلك التطبيقات الصعبة مثل تضخيم: