شركة كياجين، 203645، مجموعة هوت ستار تاك بلس ماستر ميكس (1000)

لتحضير 1000 تفاعل بحجم 20 ميكرولتر: 12 × 0.85 مل من مزيج HotStarTaq Plus الرئيسي (يحتوي على 1000 وحدة من إنزيم HotStarTaq Plus DNA بوليميراز، ومحلول منظم لتفاعل البوليميراز المتسلسل مع 3 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم، و400 ميكرومولار من كل نيوكليوتيد ثلاثي الفوسفات)، 4 × 0.55 مل من محلول CoralLoad المركز، 8 × 1.9 مل من الماء الخالي من إنزيم RNase
عرض المزيد

سمات

- وقت تنشيط سريع للإنزيم خلال 5 دقائق
- تقليل عدد خطوات استخدام الماصة يقلل من خطر التلوث
- دقة عالية في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) دون الحاجة إلى تحسين
- مادة مضافة اختيارية جاهزة للتحميل لتسهيل التعامل

أداء

بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus: بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq
تضخيم نوعي: ++
الحد الأدنى من تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل: ++
سهل الاستخدام: +++
سرعة التفعيل: ++

تخضع كل دفعة من إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase لمجموعة شاملة من اختبارات مراقبة الجودة، بما في ذلك اختبار دقيق لتحديد نوعية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وقابلية تكراره، حيث يتم تضخيم أهداف منخفضة النسخ. يتفوق مزيج HotStarTaq Plus Master Mix على مجموعات الموردين الآخرين، ويضمن نوعية عالية وأداءً فائقًا في تفاعل البوليميراز المتسلسل ذي البداية الساخنة (انظر الشكلين "أعلى نوعية" و"نوعية أعلى مع أنظمة البادئات والقوالب المختلفة"، والجدول). يضمن محلول PCR المبتكر المرفق مع المجموعة نوعية عالية في نطاق واسع من ظروف تفاعل البوليميراز المتسلسل، مما يقلل الحاجة إلى التحسين. كما يضمن مُركّز CoralLoad، المرفق أيضًا مع المجموعة، سهولة أكبر من خلال تحسين وضوح عملية السحب بالماصة، والسماح بتحميل نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل مباشرةً على الهلام. يمكن إضافة مُركّز CoralLoad إلى تفاعل البوليميراز المتسلسل دون التأثير على حساسية التضخيم أو نوعيته. وقد تم اختبار قطع PCR المُضخّمة في وجود مُركّز CoralLoad بنجاح للاستنساخ والهضم الإنزيمي دون تنقية مسبقة.

بفضل الجمع بين الخصوصية العالية وسهولة الاستخدام، يُعدّ طقم HotStarTaq Plus Master Mix مناسبًا للاستخدام مع قوالب الجينوم المعقدة أو قوالب الحمض النووي المكمل (انظر الشكل "تأثير بدء التشغيل الساخن على أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي")، وأزواج البادئات المتعددة (انظر الشكل "التضخيم النوعي في تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد")، والقوالب المعزولة من مصادر صعبة أو أهداف ذات نسخ منخفضة جدًا (انظر الشكل "تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي الخلية عالي الحساسية"). كما يُعدّ طقم HotStarTaq Plus Master Mix مناسبًا أيضًا لمشاريع مثل الفحص الجيني، حيث يتم تضخيم أعداد كبيرة من العينات.

مواصفات بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus

التركيز: 5 وحدات/ميكرولتر، إنزيم مُعاد التركيب: نعم، نظائر الركيزة: dNTP، ddNTP، dUTP، بيوتين-11-dUTP، DIG-11-dUTP، فلورسنت-dNTP/ddNTP، معدل التمديد: 2-4 كيلوبايت/دقيقة عند 72 درجة مئوية، نصف العمر: 10 دقائق عند 97 درجة مئوية؛ 60 دقيقة عند 94 درجة مئوية، كفاءة التضخيم: ≥10⁵ ضعف، نشاط إكسونوكلياز 5'–>3': نعم، إضافة إضافية A: نعم، نشاط إكسونوكلياز 3'–>5': لا، نوكليازات ملوثة: لا، RNases ملوثة: لا، بروتيازات ملوثة: لا، نشاط التحضير الذاتي: لا

مبدأ

مزيج HotStarTaq Plus Master Mix هو مزيج جاهز للاستخدام يتكون من إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase، ومحلول QIAGEN PCR Buffer، وMgCl₂، وdNTPs. يوفر إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase أداءً لا يُضاهى لإنزيم HotStarTaq DNA Polymerase مع وقت تنشيط مُختصر لا يتجاوز 5 دقائق.

يُزوَّد إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase، وهو شكل مُعدَّل من إنزيم QIAGEN Taq DNA Polymerase، في حالة غير نشطة، أي أنه لا يمتلك أي نشاط بوليميرازي في درجات الحرارة المحيطة. يمنع هذا التمديد غير النوعي للبادئات المُلتحمة وثنائيات البادئات المُتكوِّنة في درجات الحرارة المنخفضة أثناء إعداد تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ودورة PCR الأولية (انظر الشكلين "أعلى نوعية" و"نوعية عالية مع أنظمة بادئات-قوالب مختلفة"). يُنشَّط إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase بحضانة قصيرة لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية، ويمكن دمج هذه العملية بسهولة في أي برنامج لجهاز التدوير الحراري الحالي.

محلول QIAGEN PCR

يحافظ محلول QIAGEN PCR Buffer على التضخيم النوعي في كل دورة من دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من خلال تعزيز نسبة عالية من ارتباط البادئات النوعية إلى غير النوعية خلال مرحلة التلدين في كل دورة (انظر الشكل "زيادة نوعية تلدين البادئات"). وبفضل تركيبة متوازنة فريدة من كلوريد البوتاسيوم (KCl) وكبريتات الأمونيوم (NH₄)₂SO₄، يوفر هذا المحلول ظروف تلدين دقيقة للبادئات ضمن نطاق أوسع من درجات حرارة التلدين وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) مقارنةً بمحاليل PCR التقليدية. ولذلك، غالبًا ما يكون تحسين تفاعل PCR عن طريق تغيير درجة حرارة التلدين أو تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) ضئيلاً أو غير ضروري.

مركز كورال لود

تحتوي مجموعة HotStarTaq Plus Master Mix على مُركّز CoralLoad (انظر الشكل "مُركّز CoralLoad")، الذي يتضمن كاشف تحميل الجل وصبغتين لتتبع الجل. يُحسّن مُركّز CoralLoad وضوح عملية السحب بالماصة، ويُسهّل تقدير مسافة هجرة الحمض النووي، ويُحسّن وقت تشغيل جل الأغاروز. عند استخدام مُركّز CoralLoad، يُمكن تحميل نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) مباشرةً على جل الأغاروز دون إضافة مُحلول التحميل مُسبقًا.

التطبيقات

- قوالب جينومية معقدة
- قوالب الحمض النووي التكميلي المعقدة (مثل RT-PCR)
- أهداف ذات عدد نسخ منخفض للغاية (مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي الخلية)
- تفاعلات باستخدام أزواج متعددة من البادئات

تُعد مجموعة HotStarTaq Plus Master Mix Kit مناسبة للغاية لمجموعة واسعة من التطبيقات، بما في ذلك التطبيقات الصعبة مثل تضخيم: