Qiagen، 204001، مجموعة Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit (80)

لثمانين تفاعلًا: 2x مزيج Rotor-Gene SYBR Green PCR Master Mix، 10x اختبار QuantiTect Primer Assay لـ GPER، معايير، عينات مجهولة، محلول منظم TE، ماء خالٍ من RNase

سمات

- تقييم أداء Rotor-Gene Q
- تحديد دقة وقابلية تكرار نتائج اختبار Rotor-Gene Q
- نظام كامل يحتوي على جميع مكونات التفاعل

تفاصيل المنتج

تُستخدم مجموعة Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit لعرض أداء جهاز Rotor-Gene Q. تحتوي المجموعة على جميع مكونات التفاعل اللازمة لتحديد كمية الحمض النووي الجينومي المستهدف باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي القائم على SYBR Green. تشمل هذه المكونات معايير الحمض النووي الجينومي المخففة مسبقًا، وعينتين مجهولتين، ومزيجًا رئيسيًا مُحسَّنًا، وزوجًا من البادئات الخاصة بجين مستقبل الإستروجين 1 المقترن بالبروتين G البشري (GPER). باستخدام هذه المجموعة، يمكن تقييم موثوقية ودقة وحساسية تحديد كمية الجينات باستخدام جهاز Rotor-Gene Q.

مبدأ

يُتيح جهاز Rotor-Gene Q، بتصميمه الدوراني الفريد القائم على الطرد المركزي، تحديد كمية الجينات بسرعة ودقة عاليتين. توضع أنابيب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) داخل دوّار يدورها أمام مصدر ضوئي واحد وكاشف واحد في حجرة هواء متحرك. هذا يعني وجود حد أدنى من التباين البصري والحراري بين الأنابيب، مما يُتيح دقة عالية في تحديد كمية تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي. إضافةً إلى ذلك، وبفضل دوران الدوّار المستمر بسرعة 400 دورة في الدقيقة، يُمكن الحصول على البيانات بسرعة عالية.

باستخدام مجموعة Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit، يتم ضمان تضخيم عالي التخصص من خلال مزيج متوازن من الأيونات يقلل من ارتباط البادئات غير النوعي (انظر الشكل "ارتباط البادئات النوعي"). ويمكن تحقيق دورات سريعة دون المساس بالأداء باستخدام Q-Bond، وهو مُضاف جديد لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) يُمكّن من تقليل وقت تشغيل جهاز التدوير إلى 45 دقيقة فقط (انظر الشكل "ارتباط البادئات السريع").

إجراء

- قالب الحمض النووي الجينومي البشري ذو عدد نسخ محدد
- مزيج روتور-جين SYBR Green PCR الرئيسي
- اختبار QuantiTect Primer Assay الخاص بجين مستقبل الإستروجين 1 المقترن بالبروتين G البشري (GPER)

باستخدام مجموعة Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit، يتم إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي القائم على صبغة SYBR Green لتحديد كمية نسخ مختلفة من هدف الحمض النووي الجينومي. يتكون كل تفاعل من:

يحتوي دليل مجموعة أدوات Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit على ثلاثة بروتوكولات. يتبع مستخدمو Rotor-Gene إما بروتوكول الإعداد اليدوي للتفاعل أو بروتوكول الإعداد الآلي للتفاعل باستخدام QIAgility. بعد إعداد التفاعل، ينتقل المستخدمون إلى بروتوكول تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي على جهاز Rotor-Gene Q.

يمكن تجنب خطوات المعايرة اليدوية باستخدام جهاز QIAgility، وهو جهاز مكتبي صغير الحجم يوفر إعدادًا سريعًا ودقيقًا لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يقلل هذا الجهاز من أخطاء إعداد التفاعل الناتجة عن الخطأ البشري، بل وقد يمنعها تمامًا. يُكمل جهاز QIAgility بشكل مثالي مجموعة Rotor-Gene Q ومجموعات Rotor-Gene، مما يُسهل توزيع السوائل في الأنابيب، وأنابيب الشرائح، وأقراص Rotor-Discs.

يتم إنشاء منحنى معياري من قيم العتبة (CT) المُستخلصة من مجموعة من المعايير (2000، 1000، 500، 250، و125 نسخة؛ يتم تحليل كل معيار بأربع نسخ). ثم يُستخدم المنحنى المعياري لتحديد عدد النسخ لعينتين مجهولتين (500 و250 نسخة؛ يتم تحليل 24 نسخة من كل عينة مجهولة [عند إجراء إعداد التفاعل يدويًا، يمكن إعداد 4 نسخ على الأقل لكل عينة مجهولة]). بالإضافة إلى ذلك، يتم إجراء 4 تفاعلات تحكم سلبية (NTC). وبذلك، يتم تشغيل 72 تفاعلًا في الوقت نفسه على جهاز Rotor-Gene Q.

التطبيقات

تُستخدم مجموعة Rotor-Gene SYBR Green PCR Demo Kit لعرض أداء جهاز Rotor-Gene Q. كما تتوافق هذه المجموعة مع جهازي Rotor-Gene 3000 وRotor-Gene 6000. وباستخدام هذه المجموعة، يمكن تقييم دقة وموثوقية قياس كمية الجينات باستخدام جهاز Rotor-Gene Q.