شركة كياجين، 204345، مجموعة كوانتي تيكت بروبس بي آر (1000) icon_0368_ls_gen_eco_friendly-s

لـ 1000 تفاعل بحجم 50 ميكرولتر: 25 مل من مزيج QuantiTect Probe PCR Master Mix بتركيز 2x، و20 مل من الماء الخالي من RNase

سمات

- كشف عالي الحساسية للأهداف ذات النسخ المنخفضة
- تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي باستخدام مجسات محددة التسلسل أو صبغة SYBR Green
- قياس كمي دقيق عبر عدة سجلات من القالب
- لا حاجة لتحسين ظروف التفاعل والدوران
- الكشف عن ما يصل إلى 5 أهداف في نفس الأنبوب

تفاصيل المنتج

تُمكّن مجموعات QuantiTect PCR (مجموعات qPCR) من التحديد الكمي الدقيق لأهداف الحمض النووي الجينومي (gDNA) والحمض النووي المكمل (cDNA) باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (PCR) وتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي ثنائي الخطوات (RT-PCR) باستخدام مجسات مُحددة التسلسل أو كاشف SYBR Green I. كما تُتيح مجموعات PCR في الوقت الحقيقي تحديدًا كميًا موثوقًا لما يصل إلى 5 أهداف من الحمض النووي الجينومي أو الحمض النووي المكمل في أنبوب واحد باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد في الوقت الحقيقي أو تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي ثنائي الخطوات. يضمن الجمع بين خاصية البدء الساخن ونظام محلول PCR الفريد في المزيج الرئيسي الجاهز للاستخدام حساسية عالية لتفاعل qPCR على أي جهاز تدوير في الوقت الحقيقي دون الحاجة إلى تحسين. يحتوي مزيج dNTP على dUTP، مما يسمح بالمعالجة الاختيارية باستخدام UNG. ولتسهيل الاستخدام، يُمكن تخزين المزيج الرئيسي في مجموعات QuantiTect PCR في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية.

يتوفر نوعان من مجموعات أدوات تفاعل البوليميراز المتعدد باستخدام مجسات خاصة بالتسلسل: مجموعة QuantiTect Multiplex PCR لأجهزة التدوير التي تتطلب صبغة ROX لتطبيع الفلورة، ومجموعة QuantiTect Multiplex PCR NoROX لجميع أجهزة التدوير الأخرى.

أداء

الكشف عن تسلسل الانتقال t(8;14) (20 نسخة): الكشف عن تسلسل الحمض النووي المكمل GAPDH (106 نسخ)
تفاعل البوليميراز المتسلسل الثلاثي مع 105 نسخ من NFKB: 34.31
نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي النسخة المقابلة: 34.07
تفاعل البوليميراز المتسلسل الثلاثي مع 104 نسخ من NFKB: 34.61
تفاعلات البوليميراز المتسلسل أحادية النسخة المقابلة: 34.00
تفاعل البوليميراز المتسلسل الثلاثي مع 10 نسخ من NFKB: 35.17
نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل أحادي النسخة المقابلة: 34.43

الكشف عن CSBG: الكشف عن GAPDH
مزيج القوالب 1: 1400 نسخة
قيم العتبة (CT) لتفاعل البوليميراز المتسلسل الثلاثي: 27.73
قيم العتبة (CT) لتفاعلات البوليميراز المتسلسل أحادية النسخة: 27.08
مزيج القوالب 2: 140 نسخة
قيم العتبة (CT) لتفاعل البوليميراز المتسلسل الثلاثي: 31.11
قيم العتبة (CT) لتفاعلات البوليميراز المتسلسل أحادية النسخة: 30.66
مزيج القوالب 3: 14 نسخة
قيم العتبة (CT) لتفاعل البوليميراز المتسلسل الثلاثي: 34.74
قيم العتبة (CT) لتفاعلات البوليميراز المتسلسل أحادية النسخة: 33.84

إن إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase الموجود في مجموعات QuantiTect quantitative PCR يزيد من خصوصية تفاعل PCR من خلال توفير بداية ساخنة أكثر صرامة مقارنة بالبوليميرازات الأخرى.

تتيح مجموعات QuantiTect SYBR Green PCR إجراء قياس كمي دقيق ضمن نطاق خطي واسع (انظر الشكل "قياس كمي دقيق ضمن نطاق خطي واسع"). عند استخدامها مع مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit ومجموعة QuantiTect Primer Assays، توفر مجموعات QuantiTect SYBR Green PCR Kits نتائج حساسة وموثوقة (انظر الشكل "قياس كمي دقيق وحساس").

توفر مجموعات QuantiTect Probe PCR نتائج حساسة وموثوقة عند استخدامها مع مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit (انظر الشكل "حساسية وكفاءة عاليتان، ونطاق ديناميكي واسع"). يُمكّن تركيب محلول التفاعل الفريد مجموعات QuantiTect Probe PCR من توفير قياس كمي دقيق لأهداف الحمض النووي منخفضة النسخ، بالإضافة إلى قياس كمي دقيق ضمن نطاق خطي واسع (انظر الشكل "نطاق ديناميكي واسع في تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي").

يضمن مزيج QuantiTect Multiplex PCR Master Mix تضخيم منتجات PCR في تفاعل متعدد بنفس الكفاءة والحساسية مثل منتجات PCR في تفاعلات التضخيم الفردي المقابلة (انظر الجدول "قيم دورة العتبة المتشابهة (C Τ) مع تفاعلات PCR الثلاثية والأحادية"، والشكل "نتائج متشابهة مع تفاعلات PCR الرباعية والأحادية".

يمكن الكشف عن 10 نسخ فقط من الجين المستهدف باستخدام هذه المجموعات، حتى لو كان عدد نسخ الجين المرجعي في نفس التفاعل أكبر بمقدار 10 أضعاف (انظر الشكل "الكشف عن 10 نسخ من الجين المستهدف مع وجود فائض من الجين المرجعي" والجدول المقابل "نجاح تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي الثلاثي للأهداف ذات الوفرة المنخفضة والعالية").

مبدأ

المكون: الميزات
بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq: تنشيط لمدة 15 دقيقة عند 95 درجة مئوية
محلول QuantiTect SYBR Green PCR: مزيج متوازن من أيونات NH4+ و K+
مزيج dNTP: يتضمن dUTP، الذي يحل جزئيًا محل dTTP ويتيح معالجة UNG الاختيارية للتفاعلات
صبغة SYBR Green I: تُنتج إشارة فلورية قوية عند ارتباطها بالحمض النووي المزدوج السلسلة
صبغة ROX: لمعايرة الإشارات الفلورية على أجهزة Applied Biosystems، ويمكن استخدامها أيضًا على أجهزة Agilent.

المكون: الميزات
بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq: تنشيط لمدة 15 دقيقة عند 95 درجة مئوية
محلول QuantiTect Probe PCR: مزيج متوازن من أيونات NH4+ و K+
مزيج dNTP: يتضمن dUTP، الذي يحل جزئيًا محل dTTP ويتيح معالجة UNG الاختيارية للتفاعلات
صبغة ROX: لمعايرة الإشارات الفلورية على أجهزة Applied Biosystems، ويمكن استخدامها أيضًا على أجهزة Agilent.

المكون: الميزات
بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq: تنشيط لمدة 15 دقيقة عند 95 درجة مئوية
محلول QuantiTect Multiplex PCR: مزيج متوازن من أيونات NH4+ و K+
عامل التركيب MP: تحليل متعدد موثوق به لما يصل إلى 4 جينات في نفس الأنبوب
مزيج dNTP: يتضمن dUTP، الذي يحل جزئيًا محل dTTP ويتيح معالجة UNG الاختيارية للتفاعلات
صبغة ROX*: تعمل على معايرة الإشارات الفلورية على أجهزة Applied Biosystems، ويمكن استخدامها أيضًا على أجهزة Agilent.

تحتوي مجموعات QuantiTect SYBR Green PCR على مزيج رئيسي مُحسَّن وجاهز للاستخدام، مُصمَّم خصيصًا لتحديد كمية أهداف cDNA بدقة وحساسية عاليتين في الوقت الحقيقي باستخدام صبغة SYBR Green I (انظر الجدول "مكونات مجموعة QuantiTect SYBR Green PCR 2x"). تُمكِّن صبغة SYBR Green I الفلورية الموجودة في المزيج الرئيسي من تحليل العديد من الأهداف المختلفة دون الحاجة إلى تصنيع مجسات مُوسومة خاصة بكل هدف. يُعزز التوازن بين أيونات البوتاسيوم (K+) والأمونيوم (NH4+) في محلول PCR ارتباط البادئات النوعي، مما يُتيح دقة وحساسية عاليتين لتفاعل PCR (انظر الشكل "ارتباط البادئات النوعي"). بالإضافة إلى ذلك، يُوفر إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase بداية ساخنة صارمة، مما يمنع تكوُّن نواتج غير نوعية.

تحتوي مجموعات QuantiTect Probe PCR على مزيج رئيسي مُحسَّن وجاهز للاستخدام، يُتيح قياسًا كميًا دقيقًا وحساسًا للغاية في الوقت الحقيقي لأهداف الحمض النووي الجينومي (gDNA) والحمض النووي المكمل (cDNA) باستخدام مجسات مُحددة التسلسل (انظر الجدول "مكونات مجموعة QuantiTect Probe PCR 2x"). صُممت هذه المجموعات للاستخدام مع جميع أنواع المجسات المُحددة التسلسل، بما في ذلك مجسات الكشف عن طريق التحلل المائي (مثل TaqMan® وغيرها من المجسات ثنائية التسمية)، ومجسات FRET، والمجسات الجزيئية. تحتوي مجموعات QuantiTect Probe PCR على محلول منظم فريد لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) يحتوي على مزيج متوازن من أيونات البوتاسيوم (K+) والأمونيوم (NH4+)، مما يُعزز ارتباط البادئات النوعية، ويُمكّن من الحصول على دقة وحساسية عاليتين في تفاعل البوليميراز المتسلسل (انظر الشكل "ارتباط البادئات النوعية"). بالإضافة إلى ذلك، يُوفر إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase بداية ساخنة صارمة، مما يمنع تكوين نواتج غير نوعية.

تُمكّن مجموعات QuantiTect Multiplex PCR من إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) ثنائي الخطوات بنجاح من المحاولة الأولى (انظر مخطط "مجموعات QIAGEN متعددة التضخيم"). يضمن المزيج الرئيسي المُحسَّن تضخيم نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل في التفاعل المتعدد بنفس الكفاءة والحساسية التي تُضخَّم بها نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل في تفاعلات التضخيم الفردية المقابلة. ويمكن الكشف عن 10 نسخ فقط من الجين المستهدف باستخدام هذه المجموعة.

يُحسّن تضخيم الجينات المرجعية والمستهدفة في تفاعل واحد، بدلاً من تفاعلات منفصلة، ​​من دقة قياس كمية الجينات بتقليل أخطاء المعالجة. يحتوي مزيج QuantiTect Multiplex PCR Master Mix على مزيج متوازن من أيونات البوتاسيوم (K+) والأمونيوم (NH4+)، بالإضافة إلى العامل الاصطناعي الفريد MP، الذي يُعزز معًا ارتباطًا مستقرًا وفعالًا للبادئات والمجسات بقالب الحمض النووي، مما يُتيح كفاءة عالية في تفاعل البلمرة المتسلسل (انظر جدول "مكونات مجموعة QuantiTect Multiplex PCR Kit 2x"). علاوة على ذلك، يُوفر إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase بداية ساخنة صارمة، مانعًا تكوين نواتج غير نوعية.

تحتوي الخلطات الرئيسية في مجموعات QuantiTect PCR أيضًا على dUTP، مما يتيح المعالجة المسبقة باستخدام uracil-N-glycosylase (UNG) قبل بدء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، مما يضمن عدم تأثير أي منتجات PCR ملوثة على تفاعلات PCR اللاحقة.

إجراء

صبغة روكس: طقم
مُرفق في مزيج رئيسي: مجموعة كوانتي تيك متعددة التفاعلات الكيميائية المتسلسلة
غير موجود في المزيج الرئيسي: مجموعة QuantiTect Multiplex PCR NoROX

إذا لزم الأمر، يمكن معالجة التفاعلات مسبقًا باستخدام إنزيم يوراسيل-إن-جليكوزيلاز (UNG) للتخلص من بقايا نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من التفاعلات السابقة. وللحصول على أفضل النتائج في تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي ثنائي الخطوات في الوقت الحقيقي، نوصي بتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) باستخدام مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit. توفر هذه المجموعة تخليقًا سريعًا للحمض النووي التكميلي في غضون 20 دقيقة فقط مع إزالة متكاملة لتلوث الحمض النووي الجينومي.

تُغني مجموعات QuantiTect SYBR Green و Probe PCR عن الحاجة إلى تحسين ظروف التفاعل، وهو أمر قد يكون شاقًا ومُستهلكًا للوقت. ما عليك سوى إضافة البادئات وقالب الحمض النووي إلى مزيج التفاعل الرئيسي الجاهز للاستخدام، ثم بدء التفاعل. اتبع البروتوكول الوارد في الدليل للحصول على نتائج سريعة وموثوقة على أي جهاز تضخيم الحمض النووي في الوقت الحقيقي.

تضمن مجموعات QuantiTect SYBR Green PCR Kits مع فحوصات QuantiTect Primer Assays نتائج دقيقة للغاية في تحليل التعبير الجيني. هذه مجموعات بادئات مُعتمدة بيولوجيًا على مستوى الجينوم، مُصممة للكشف عن النسخ الجينية من الإنسان والفأر والجرذ والعديد من الأنواع الأخرى. يُمكن طلب فحوصات QuantiTect Primer Assays بسهولة عبر الإنترنت من GeneGlobe.

تحتوي مجموعات QuantiTect Multiplex PCR على مزيج رئيسي جاهز للاستخدام، مما يُغني عن الحاجة إلى تحسين ظروف التفاعل والدوران. يتضمن الدليل بروتوكولًا واحدًا يُمكن استخدامه مع جميع أجهزة التدوير الحراري المتاحة، كما يُدرج الأصباغ الموصى بها.

تتوفر مجموعات الاختبار مع أو بدون صبغة ROX المرجعية السلبية في المزيج الرئيسي، مما يتيح استخدامها على أي جهاز تضخيم متسلسل في الوقت الحقيقي تقريبًا (انظر الجدول "اختيار مجموعة QuantiTect Multiplex PCR المناسبة"). وبفضل تركيزات ROX المُحسّنة، يُمكن الكشف حتى عن أعداد النسخ المنخفضة من خلال التحليل التلقائي للبيانات.

التطبيقات

يمكن استخدام مجموعات QuantiTect PCR لتحليل التعبير الجيني للحمض النووي المكمل (cDNA) أو لتحديد كمية الحمض النووي الجينومي (gDNA) على أي جهاز تفاعل كيميائي متسلسل في الوقت الحقيقي. يشمل ذلك أجهزة من شركات Applied Biosystems وBio-Rad وCepheid وEppendorf وRoche وAgilent. بالنسبة لجهاز Rotor-Gene Q وأجهزة Rotor-Gene الأخرى، نوصي باستخدام مجموعات Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit أو Rotor-Gene Probe PCR Kit أو Rotor-Gene Multiplex PCR Kit، المصممة خصيصًا للتفاعل السريع على هذه الأجهزة.