Qiagen، 205824، QuantiNova IC Probe Assay Red 650 (500)

1000 ميكرولتر من مزيج البادئ/المسبار (10x) لـ 500 تفاعل، يكشف مسبار IC الأحمر (علامة نظيرة Cy5) عن الحمض النووي الريبي (RNA) والحمض النووي (DNA) للتحكم الداخلي من QuantiNova

سمات

- تخلص من القطع الأثرية باستخدام مزيج إزالة الحمض النووي الجينومي
- مراقبة عملية تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) بنجاح باستخدام عنصر التحكم الداخلي
- تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) ضمن نطاق خطي واسع باستخدام إنزيم النسخ عالي الألفة

تفاصيل المنتج

توفر مجموعة QuantiNova للنسخ العكسي إجراءً سريعًا ومريحًا لتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) مع إزالة متكاملة للحمض النووي الجينومي وعنصر تحكم داخلي إضافي. يتم التخلص من تلوث الحمض النووي الجينومي في عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA) بشكل فعال بواسطة مزيج إزالة الحمض النووي الجينومي. توفر مجموعة QuantiNova للنسخ العكسي كل ما تحتاجه لعملية نسخ عكسي سريعة وفعالة. تم تحسين الحمض النووي التكميلي المُصنّع للاستخدام في تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) في الوقت الحقيقي، مما يسمح بالقياس الكمي الموثوق للأهداف من جميع مناطق نسخ الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA).

يمكن استخدام الحمض النووي الريبوزي (RNA) للتحكم الداخلي لاختبار نجاح النسخ العكسي والتضخيم باستخدام اختبار QuantiNova IC Probe Assay (علامة Max، رقم المنتج 205813) أو اختبار QuantiNova IC Probe Assay Red 650 (علامة Cy5 التناظرية، رقم المنتج 205824) للكشف القائم على المجس. للكشف القائم على SYBR Green، يُرجى الطلب عبر منصة GeneGlobe الخاصة بنا: اختبار QuantiNova IC SYBR Green Assay (متوفر تحت اسم HS_QIC_2467742 QuantiNova LNA PCR Reference Assay ومعرف GeneGlobe: SBH1218551).

مبدأ

المكون: الفوائد
مزيج إزالة الحمض النووي الجينومي: الكشف عن الحمض النووي الريبي فقط في تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي في الوقت الحقيقي
الحمض النووي الريبي للتحكم الداخلي: التحقق من نجاح أداء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي
إنزيم النسخ العكسي QuantiNova: استخدام نطاق واسع من كميات الحمض النووي الريبي (10 بيكوغرام - 5 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي) حساسية عالية
نظام التخزين المؤقت QuantiNova RT: قراءة القوالب الصعبة
مزيج بادئات النسخ العكسي: تخليق الحمض النووي التكميلي من جميع مناطق النسخ، حتى من المناطق 5'

يتميز إنزيم النسخ العكسي QuantiNova بألفة عالية للحمض النووي الريبوزي (RNA) وقدرة على تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) من نطاق واسع من كميات الحمض النووي الريبوزي (10 بيكوغرام - 5 ميكروغرام) (انظر الشكل "القياس الكمي الدقيق من 5 ميكروغرام - 10 بيكوغرام من الحمض النووي الريبوزي"). توفر المجموعة كميات كبيرة من قالب الحمض النووي التكميلي لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR)، بغض النظر عن موقع المنطقة المستهدفة المُضخمة على النسخة. حتى القوالب الصعبة، مثل تلك ذات المحتوى العالي من الجوانين والسيتوزين (GC) أو البنية الثانوية المعقدة، يتم نسخها عكسيًا بنجاح. كما تم تحسين محلول QuantiNova RT Buffer ليكون متوافقًا مع محاليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي. للحصول على نتائج دقيقة في فحوص التعبير الجيني بتقنية RT-PCR الكمي، من المهم تضخيم الحمض النووي التكميلي فقط والكشف عنه. يمكن إزالة تداخل الحمض النووي الجينومي بكفاءة وسرعة باستخدام مزيج إزالة الحمض النووي الجينومي (انظر الشكل "الإزالة الفعالة للحمض النووي الجينومي الملوث تضمن القياس الكمي الدقيق للنسخ"). يتم توفير الوقت وخفض التكاليف، إذ لا يتطلب الأمر هضمًا منفصلاً باستخدام إنزيم DNase أثناء أو بعد تنقية عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA). كما لا حاجة لتصميم بادئات أو مجسات خاصة بالحمض النووي الريبوزي. يتيح لك الكشف عن الاختلافات في تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) التحقق من قابلية تكرار النتائج. عنصر التحكم الداخلي المُطوَّر حديثًا عبارة عن نسخة مُحدَّدة (جزيء RNA) يمكن إضافتها اختياريًا إلى العينات ونسخها إلى cDNA. وهو مُصمَّم للإبلاغ عن أعطال الأجهزة أو المواد الكيميائية، وأخطاء إعداد التحليل، ووجود مثبطات. ولأن عنصر التحكم الداخلي يتصرف بشكل مشابه للنسخ الحقيقية، يمكن استخدامه لتأكيد نجاح النسخ العكسي والتضخيم في تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) اللاحق (انظر الشكل "عنصر التحكم الداخلي يكشف وجود المثبطات بدقة").

إجراء

لا تستغرق عملية إزالة الحمض النووي الجينومي وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) سوى 20 دقيقة باستخدام مجموعة كوانتينوفا للنسخ العكسي. تحتوي المجموعة على كل ما تحتاجه لتخليق الحمض النووي التكميلي بسرعة.

يُحضن الحمض النووي الريبوزي (RNA) النقي لفترة وجيزة في مزيج إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA Removal Mix) لإزالة الحمض النووي الجينومي الملوث بكفاءة. وعلى عكس الطرق الأخرى، تُستخدم عينة الحمض النووي الريبوزي مباشرةً في عملية النسخ العكسي مع مزيج رئيسي مُحضر من مزيج النسخ العكسي وإنزيم النسخ العكسي. وباستخدام إنزيم النسخ العكسي من كوانتينوفا، يُمكن نسخ الحمض النووي الريبوزي في درجات حرارة منخفضة، حتى في وجود بنى ثانوية معقدة. وهذا يضمن بقاء الحمض النووي الريبوزي سليمًا، حيث يتم التفاعل عند درجة حرارة 42 درجة مئوية، ثم يتم تعطيله عند درجة حرارة 85 درجة مئوية. ولا حاجة إلى خطوات إضافية لتمسخ الحمض النووي الريبوزي أو هضمه بواسطة إنزيم RNase H.

يمكن نسخ الحمض النووي الريبي للتحكم الداخلي (IC) في نفس الوقت مع عينة الحمض النووي الريبي، وهو يهدف إلى الإبلاغ عن وجود مثبطات أو أعطال في الجهاز أو الكيمياء أو أخطاء في إعداد الفحص.

تُستخدم مجموعة QuantiNova IC Probe Assay (Max label, cat. no. 205813) أو QuantiNova IC Probe Assay Red 650 (Cy5 analog label, cat. no. 205824) لإجراءات الكشف القائمة على المجس للحمض النووي الريبي أو الحمض النووي للتحكم الداخلي المتوفر في مجموعة QuantiNova Reverse Transcription Kit، أو مجموعة QuantiNova Probe RT-PCR Kit (one-step RT-PCR) أو مجموعة QuantiNova Pathogen +IC Kit.

يُستخدم اختبار QuantiNova IC SYBR Green (رقم المنتج SBH1218551) مع الحمض النووي الريبوزي (RNA) للتحكم الداخلي المُرفق في مجموعة QuantiNova Reverse Transcription Kit (تقنية RT-PCR ثنائية الخطوات)، ومجموعة QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit (تقنية RT-PCR أحادية الخطوة)، ومجموعة QIAcuity OneStep Eva Green Kit. ويتيح هذا الاختبار تقييم أداء النسخ العكسي/التضخيم باستخدام مجموعة QuantiNova SYBR Green PCR Kit (تقنية RT-PCR ثنائية الخطوات)، ومجموعة QuantiNova SYBR Green RT-PCR Kit (تقنية RT-PCR أحادية الخطوة)، ومجموعة QIAcuity OneStep Eva Green Kit، أو لوحات QuantiNova LNA PCR Custom Panels.

لتبسيط سير العمل، نوصي بدمج مجموعات QuantiNova مع فحوصات أو لوحات QuantiNova المصممة مسبقًا بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي. توفر هذه المجموعات قياسًا دقيقًا لنسخ mRNA أو نسخ RNA الطويلة غير المشفرة، بغض النظر عن وفرتها. اختر من بين مجموعة واسعة من مجموعات البادئات المصممة مسبقًا للإنسان والفأر والجرذ، أو صمم فحوصاتك ولوحاتك الخاصة باستخدام أدوات التصميم المتقدمة لدينا.

تستخدم فحوصات QuantiNova LNA PCR و QuantiNova LNA Probe PCR تقنية LNA لزيادة الحساسية، مما يتيح الحصول على ملفات تعريف غير متحيزة للتعبير الجيني ورؤى علمية أسرع.

ملاحظة: كان اختبار QuantiNova IC SYBR Green متاحًا سابقًا باسم QuantiTect Primer Assay للكشف عن الحمض النووي الريبي IC باستخدام SYBR (رقم الكتالوج QT02589307).