Qiagen، 206047، مجموعة Type-it Fast SNP Probe PCR (4000)

لإجراء تفاعلات بحجم 4000 × 25 ميكرولتر: 2 × 25 مل من مزيج Type-it Fast SNP Probe PCR Master Mix بتركيز 2x، ومحلول Q بتركيز 5x، وماء خالٍ من إنزيم RNase

سمات

- تم التحقق من صحتها باستخدام فحوصات تحديد النمط الجيني SNP بتقنية TaqMan®
- تحديد الأليلات آليًا وتجمعات الفلورة الضيقة
- مناسب لمواقع SNP الصعبة أو كميات القوالب المنخفضة جدًا
- توفير يصل إلى 40% من الوقت بفضل إجراءات الدورة السريعة

أداء

تضمن مجموعة Type-it Fast SNP Probe PCR Kit باستمرار تحديد النمط الجيني SNP بدقة عالية.

ارتباط دقيق ومحدد للغاية للمسبار الخاص بالأليل

يعتمد مزيج Type-it Fast SNP Genotyping PCR Master Mix على بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus عالي التخصص ونظام عازل PCR مُطوَّر حديثًا لتحديد النمط الجيني للنيوكليوتيدات المفردة، وكلاهما يُتيح ارتباطًا عالي التخصص بالمجسات وإشارات فلورية قوية باستمرار. بالمقارنة مع تركيبات مزيج تحديد النمط الجيني للنيوكليوتيدات المفردة الأخرى المتوفرة تجاريًا، يُحقق هذا المزيج فصلًا أوسع وأوضح لمجموعات الأليلات (انظر الشكل "ارتباط عالي التخصص بالمجسات").

أسعار المكالمات مرتفعة حتى بالنسبة لمبالغ القوالب المنخفضة

حتى مع الأهداف الصعبة أو مواقع SNP المعقدة، توفر مجموعة Type-it Fast SNP Probe PCR Kit تحديدًا موثوقًا للنمط الجيني SNP، حيث يتم الحصول على مجموعات أليلات منفصلة جيدًا وتجميع محكم للأليلات المتطابقة، مما يؤدي إلى معدلات استدعاء عالية (انظر الشكل "استدعاء الأليلات الآلي الناجح"). تفوقت مجموعة Type-it Fast SNP Probe PCR Kit على المجموعات التي تم اختبارها من موردين آخرين، مما يضمن تجميعًا محكمًا للأليلات - حتى مع 1 نانوغرام من الحمض النووي القالب (انظر الشكل "تحديد النمط الجيني SNP الموثوق بكميات صغيرة من القالب").

مبدأ

محتويات المجموعة: الميزات
تنسيق مزيج رئيسي مزدوج*: تم تطويره لتحديد النمط الجيني للنيوكليوتيدات المفردة باستخدام مجسات TaqMan® MGB. مناسب للاستخدام مع جميع أجهزة التدوير الحراري المناسبة لتحديد النمط الجيني للنيوكليوتيدات المفردة.
بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus: تحضير سريع وسهل للتفاعل في درجة حرارة الغرفة. تضخيم عالي التخصص، حتى مع كميات قليلة من القالب.
محلول Type-it Fast SNP Probe PCR Buffer: فصل واسع لمجموعات الأنماط الجينية، مجموعات أليلات متقاربة ومعدلات عالية لتحديد الأليلات، زيادة في خصوصية ارتباط المجس، دورات سريعة بفضل جزيء Q-Bond.
الحل الأمثل: تجمعات أكثر تماسكًا وإشارات أعلى في تحليل مخطط التشتت لمواقع SNP الغنية جدًا بـ GC، مما يُحسّن بشكل أكبر من تحديد الأليلات غير الأمثل

تتوفر مجموعة Type-it Fast SNP Probe PCR Kit في شكل مزيج رئيسي سهل الاستخدام، يتكون من بوليميراز HotStarTaq Plus عالي التخصص ونظام محلول منظم فريد لتحديد النمط الجيني SNP، مصمم لتضخيم سريع وفعال. توفر مكونات المجموعة الفريدة تجميعًا دقيقًا للأليلات وفصلًا ممتازًا لضمان معدلات استدعاء عالية، مما يتيح الحصول على نتائج دقيقة وقابلة للتكرار (انظر الجدول).

خصوصية وحساسية عاليتان

يُوفّر مزيج التضخيم الرئيسي إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus، الذي يضمن تضخيمًا عالي التخصص حتى مع كميات قليلة من القالب. يُقدّم إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus في حالة غير نشطة، أي بدون أي نشاط بوليميراز في درجات الحرارة المحيطة. يمنع هذا تكوّن نواتج التضخيم الخاطئة وثنائيات البادئات في درجات الحرارة المنخفضة.

نظام تخزين مؤقت فريد

تم تصميم محلول Type-it Fast SNP PCR Buffer، المضمن أيضًا في المزيج الرئيسي، خصيصًا لتحديد النمط الجيني للنيوكليازات المفردة (SNP) بسرعة باستخدام مجسات نوكلياز 5' محددة التسلسل. يضمن التركيب الفريد لهذا المحلول ارتباطًا دقيقًا ودقيقًا للغاية للمجس المحدد للأليل (مجس المطابقة). ويعود ذلك إلى اختلاف سلوك انصهار المجسات، مما ينتج عنه نطاق أضيق لدرجة حرارة انصهارها. استنادًا إلى محلول QIAGEN PCR Buffer الأصلي، تُمكّن هذه التركيبة المبتكرة من تحقيق نسبة عالية من ارتباط البادئات النوعية إلى غير النوعية خلال خطوة التلدين القصيرة في كل دورة من دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). بفضل مزيج متوازن فريد من كلوريد البوتاسيوم (KCl) وكبريتات الأمونيوم (NH₄₂SO₄)، يوفر محلول PCR Buffer ظروف تلدين دقيقة للبادئات ضمن نطاق أوسع من درجات حرارة التلدين وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) مقارنةً بمحاليل PCR التقليدية. وبذلك، تقل الحاجة بشكل كبير إلى تحسين تفاعل PCR عن طريق تغيير درجة حرارة التلدين أو تركيز أيونات المغنيسيوم، وغالبًا ما يكون ذلك غير ضروري.

تُوفّر الإضافات الموجودة في محلول Type-it Fast SNP PCR، مثل Q-Solution، ظروف تفاعل مناسبة لتضخيم المناطق الجينومية الصعبة ومواقع SNP المعقدة. وتتيح تقنية Q-Bond المبتكرة (للدورات السريعة) الحصول على نتائج تحديد النمط الجيني لـ SNP بشكل أسرع (انظر الشكل "آلية الدورات السريعة أثناء التلدين"). يحتوي المزيج الرئيسي أيضًا على صبغة ROX بتركيز متوافق مع تحديد النمط الجيني لـ SNP على جميع أجهزة Applied Biosystems. ومع ذلك، فإن صبغة ROX متوافقة أيضًا مع الأجهزة الأخرى التي لا تتطلب ROX كصبغة مرجعية سلبية (انظر الجدول).

إجراء

راكبو الدراجات: نموذج
أجهزة تدوير تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي: QIAGEN: Rotor-Gene Q، ABI PRISM 7900 (جميع السلاسل)، ABI StepOne و StepOne Plus، Applied Biosystems 7500 (جميع السلاسل)، Applied Biosystems ViiA 7، Bio-Rad: iCycler iQ، Bio-Rad: سلسلة CFX، Roche: LightCycler 480، Roche: LightCycler Nano، Agilent: Mx3000P و Mx3005P
أجهزة التدوير القياسية: جميع أجهزة التدوير في أوضاع التدرج القياسي (مثل GeneAmp 9700) جميع أجهزة التدوير في أوضاع التدرج السريع (مثل GeneAmp 9800)

تم التحقق من فعالية مجموعة Type-it Fast SNP Probe PCR Kit باستخدام فحوصات التنميط الجيني SNP المتوفرة تجاريًا، وهي متوافقة مع مجسات TaqMan® MGB، بالإضافة إلى فحوصات المجسات التي يطورها المستخدمون والتي تتكون من مجسات TaqMan® MGB أو TaqMan® أو غيرها من المجسات ثنائية التسمية. تتضمن المجموعة بروتوكولات مبسطة ومُحسَّنة مسبقًا لتحليل سريع وموثوق.

إجراء دورة سريعة للحصول على نتائج مباشرة

يوفر مزيج التفاعل الرئيسي Type-it Fast SNP Probe PCR ظروف تفاعل سريعة باستخدام مجسات محددة التسلسل. يحتوي المحلول المنظم على جزيء Q-Bond الخاص، مما يسمح بأوقات دورات قصيرة على أجهزة التدوير القياسية وأجهزة التدوير السريعة ذات معدلات التسخين العالية. تزيد عملية التدوير السريع من الإنتاجية عن طريق تقليل أوقات تشغيل تفاعل البوليميراز المتسلسل بنسبة تصل إلى 40% (انظر الشكل "سير عمل تحديد النمط الجيني").

مجموعة أدوات مريحة

تأتي المجموعة في شكل مزيج رئيسي مُحسَّن وجاهز للاستخدام، مما يوفر راحة أكبر. يُسهم استخدام المزيج الرئيسي في توفير الوقت، وتبسيط عملية تحضير التفاعل، وزيادة دقة النتائج من خلال التخلص من العديد من مصادر أخطاء السحب والتلوث المحتملة، حيث يتم تقليل خطوات السحب والتخلص من العمليات الحسابية المُرهقة. يتم تنشيط إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus (الموجود في المزيج الرئيسي) من خلال حضانة لمدة 5 دقائق عند درجة حرارة 95 درجة مئوية، والتي يُمكن دمجها بسهولة في برامج التدوير الحراري الحالية. يُعد تحضير التفاعل في درجة حرارة الغرفة باستخدام المزيج الرئيسي سريعًا وسهلاً.

الأدوات المناسبة

تم تحسين مجموعة Type-it Fast SNP Probe PCR لتضخيم فحوصات SNP PCR على أي معيار مناسب وجهاز تدوير سريع متوافق مع لوحات PCR البصرية التي تتناسب مع أجهزة PCR في الوقت الحقيقي المستخدمة لتحليل قراءة لوحة الفلورة (انظر الجدول).

التطبيقات

- تحديد مواقع الأمراض
- اكتشاف المؤشرات الحيوية

تُستخدم مجموعة Type-it Fast SNP Probe PCR Kit للكشف عن تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNPs) باستخدام مجسات TaqMan® MGB، ويمكن استخدامها في مجالات بحثية متنوعة، بما في ذلك: