شركة كياجين، 206143، مجموعة كياجين متعددة تفاعلات البوليميراز المتسلسل (100) icon_0368_ls_gen_eco_friendly-s

لـ 100 × 50 ميكرولتر من تفاعلات PCR المتعددة: 2x QIAGEN Multiplex PCR Master Mix (توفير تركيز نهائي قدره 3 ملي مولار من MgCl2، 3 × 0.85 مل)، 5x Q-Solution (1 × 2.0 مل)، ماء خالٍ من RNase (2 × 1.7 مل).
عرض المزيد

سمات

- لا حاجة إلى تحسين
- دقة وحساسية عاليتان مع خاصية التشغيل السريع المدمجة
- مناسب للغاية للعديد من أنواع تطبيقات تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد
- سهل الاستخدام وفعال من حيث التكلفة

أداء

تفوقت مجموعة QIAGEN Multiplex PCR على مجموعات أخرى تم اختبارها من موردين مختلفين، وتضمن تضخيمًا عالي التخصص والحساسية لتفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد (انظر الشكل "نجاح تفاعل البوليميراز المتسلسل 16-plex"). يمكن استخدام هذه المجموعة بنجاح في تطبيقات متعددة، مثل تحديد النمط الجيني للكائنات المعدلة وراثيًا (انظر الشكل "النمط الجيني للفئران المعدلة وراثيًا") وتحليل التكرارات الميكروية (انظر الشكل "نجاح تحليل التكرارات الميكروية"). يحتوي المزيج الرئيسي على إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase لتضخيم فعال لأهداف متعددة بالتوازي. كما تم تحسين كفاءة التضخيم بشكل أكبر باستخدام محلول منظم مبتكر لتفاعل البوليميراز المتسلسل، وهو مُضمن أيضًا في المزيج الرئيسي. يضمن هذا المحلول الفريد خصوصية تفاعل البوليميراز المتسلسل في نطاق واسع من ظروف التفاعل، مما يقلل الحاجة إلى التحسين. يمكن تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل غير الأمثل باستخدام Q-Solution، وهو مُضاف لتضخيم القوالب الغنية بالـ GC، والمُرفق أيضًا مع المجموعة.

مواصفات بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq

التركيز: 5 وحدات/ميكرولتر، إنزيم مُعاد التركيب: نعم، نظائر الركيزة: dNTP، ddNTP، dUTP، بيوتين-11-dUTP، DIG-11-dUTP، فلورسنت-dNTP/ddNTP، معدل التمديد: 2-4 كيلوبايت/دقيقة عند 72 درجة مئوية، نصف العمر: 10 دقائق عند 97 درجة مئوية؛ 60 دقيقة عند 94 درجة مئوية، كفاءة التضخيم: ≥10 أضعاف، نشاط إكسونوكلياز 5'–>3': نعم، إضافة إضافية A: نعم، نشاط إكسونوكلياز 3'–>5': لا، نوكليازات ملوثة: لا، RNases ملوثة: لا، بروتيازات ملوثة: لا، نشاط التحضير الذاتي: لا >

مبدأ

تُعدّ مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Kit أول مجموعة مُصممة خصيصًا لتفاعل البوليميراز المتعدد (multiplex PCR Kit)، وهي مُتاحة في شكل مزيج رئيسي سهل الاستخدام. يحتوي مزيج QIAGEN Multiplex PCR Master Mix على تراكيز مُحسّنة مُسبقًا من إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase وMgCl₂، بالإضافة إلى dNTPs ومحلول منظم مبتكر لتفاعل البوليميراز المتعدد. تُمكّن هذه المجموعة من نجاح تفاعل البوليميراز المتعدد من المحاولة الأولى. لا حاجة لضبط ظروف التفاعل (مثل تراكيز البادئات، وMg²⁺، وإنزيم Taq DNA polymerase) ومعايير دورات التفاعل، وذلك بفضل الكواشف الفريدة المُحسّنة مُسبقًا والمُضمنة في المجموعة.

بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq

إن إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase هو شكل مُعدَّل من إنزيم Taq DNA polymerase، ولا يمتلك أي نشاط بوليميرازي في درجات الحرارة المحيطة. هذا يمنع استطالة البادئات غير المُرتبطة بشكل نوعي، وثنائيات البادئات التي تتشكل في درجات حرارة منخفضة أثناء تحضير تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) ودورة التفاعل الأولية. يتم تنشيط إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase عن طريق حضانة لمدة 15 دقيقة عند 95 درجة مئوية، ويمكن دمج هذه العملية في أي برنامج لجهاز التدوير الحراري الحالي.

محلول منظم تفاعل البوليميراز المتعدد

يحتوي هذا المحلول المنظم الخاص على مزيج مُحسَّن من أيونات البوتاسيوم (K⁺) والأمونيوم (NH₄⁺)، بالإضافة إلى مُضاف تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الفريد، العامل MP، الذي يزيد من التركيز الموضعي للبادئات عند القالب. يعمل العامل MP، جنبًا إلى جنب مع أيونات البوتاسيوم (K⁺) وأيونات أخرى، على تثبيت البادئات المرتبطة بشكلٍ نوعي، مما يسمح بتمديد البادئات بكفاءة بواسطة بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq (انظر الشكل "التصاق البادئات المستقر والفعال"). يحافظ هذا المحلول المنظم المبتكر على التضخيم النوعي في كل دورة من دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من خلال تعزيز نسبة عالية من ارتباط البادئات النوعية إلى غير النوعية خلال مرحلة الالتصاق في كل دورة. بفضل مزيج متوازن فريد من كلوريد البوتاسيوم (KCl) وكبريتات الأمونيوم (NH₄⁺)، يوفر هذا المحلول المنظم ظروفًا صارمة لتصاق البادئات ضمن نطاق أوسع من درجات حرارة الالتصاق وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) مقارنةً بمحاليل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) التقليدية. لذلك، غالبًا ما يكون تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عن طريق تغيير درجة حرارة الالتصاق أو تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) ضئيلًا أو غير ضروري.

كيو-سوليوشن

يُرفق مع إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq مُضاف Q-Solution، وهو مُضاف مبتكر لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) يُسهّل تضخيم القوالب الصعبة عن طريق تعديل سلوك انصهار الحمض النووي. يُحسّن هذا الكاشف الفريد تفاعل البوليميراز المتسلسل غير الأمثل الناتج عن القوالب ذات البنية الثانوية العالية أو القوالب الغنية بالـ GC. على عكس مُضافات تفاعل البوليميراز المتسلسل الأخرى الشائعة الاستخدام، مثل DMSO، يُستخدم مُضاف Q-Solution بتركيز واحد فقط، وهو غير سام، ويضمن نقاء تفاعل البوليميراز المتسلسل.

إجراء

تأتي مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Kit في مزيج رئيسي مُحسَّن وجاهز للاستخدام، مما يوفر راحة أكبر. يُسهم استخدام المزيج الرئيسي في توفير الوقت، وتبسيط عملية تحضير التفاعل، وزيادة دقة النتائج من خلال التخلص من العديد من مصادر أخطاء المعايرة والتلوث المحتملة، حيث يتم تقليل خطوات المعايرة والاستغناء عن الحسابات المُرهقة. كل ما عليك فعله هو إضافة البادئات والقالب لتحضير مزيج التضخيم النهائي. يُمكن تخزين المزيج الرئيسي في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية، مما يُتيح تحضيرًا أسرع لتفاعلات PCR المتعددة. يضمن البروتوكول المُبسط والمُفصَّل المُرفق مع المجموعة تحضيرًا سريعًا وسهلاً لتفاعل PCR. يُمكن تحضير التفاعلات في درجة حرارة الغرفة، مما يضمن راحة وسهولة أكبر في الاستخدام. يتم تنشيط إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase من خلال خطوة حضانة لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة 95 درجة مئوية، والتي يُمكن دمجها بسهولة في برامج التدوير الحراري الحالية.

التطبيقات

- تصنيف وتحليل الكائنات المعدلة وراثيًا
- تضخيم وتحليل الأقمار الميكروية
- تصنيف البكتيريا والفيروسات والكشف عنها
- تضخيم مناطق متعددة من الحمض النووي لتحليل تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة

تُعد مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Kit مناسبة للغاية للعديد من التطبيقات المتعددة، بما في ذلك: