شركة كياجين، 206152، مجموعة كياجين متعددة تفاعلات البوليميراز المتسلسل بلس (100)

لـ 100 تفاعل PCR متعدد بحجم 50 ميكرولتر: 2x مزيج رئيسي لتفاعل PCR المتعدد (3 × 0.85 مل)، 5x محلول Q (1 × 2 مل)، ماء خالٍ من RNase (2 × 1.9 مل)، 10x صبغة CoralLoad (1 × 1.2 مل)

سمات

- نجاح تفاعل البوليميراز المتعدد للتطبيقات المتقدمة
- نتائج متسقة وموثوقة
- إنشاء سريع لاختبارات تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد دون تحسين
- أوقات استجابة أسرع وراحة أكبر

أداء

مصدر الحمض النووي أو الحمض النووي التكميلي: التطبيق
النباتات والحيوانات/البشر: تحليل الحمض النووي الساتلي (مثل تحليل STR أو VNTR)، تصنيف النباتات/الحيوانات المعدلة وراثيًا، تحليل السلالة (مثل حيوانات المزرعة)، تحليل الكائنات المعدلة وراثيًا، الكشف عن مسببات الأمراض، تحليل الأغذية، تحديد الجنس، الكشف عن الطفرات، تضخيم مواقع SNP، التحليل الجيني النوعي وشبه الكمي، تحديد أشكال التضفير.
البكتيريا/الفيروسات: تحليل النظافة، الكشف عن مسببات الأمراض، التنميط الجيني للميكروبات
العينات البيئية: دراسة الميتاجينومات
أخرى: تجميع فحوصات أحادية (توفير الوقت والتكلفة) إثراء الهدف للتسلسل عالي الإنتاجية للحمض النووي القديم التعبير الجيني

تعتمد مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Plus على تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد الخاصة بشركة QIAGEN، وتضمن نجاح التفاعل من المحاولة الأولى. يحتوي المزيج الرئيسي المُحسَّن مسبقًا على إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase ونظام محلول منظم مبتكر لتفاعل البوليميراز المتسلسل، تم تطويره خصيصًا لهذا الغرض. تعمل آلية البدء الساخن الدقيقة التي يوفرها إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase والتركيبة الفريدة للمحلول المنظم على زيادة خصوصية التفاعل المتعدد من خلال منع استطالة البادئات غير المرتبطة بشكل نوعي وثنائيات البادئات.

دقة وحساسية عاليتان، دون الحاجة إلى تحسين.

تفوقت مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit على مجموعات الاختبار من موردين آخرين، إذ توفر دقة وحساسية عاليتين في تطبيقات تفاعل البوليميراز المتعدد (PCR)، مما يُغني عن الحاجة إلى تحسين معايير التفاعل (انظر الشكلين "تفاعل PCR فعال ذو 19 قاعدة" و"تفاعل PCR ناجح ذو 16 قاعدة على نطاق واسع من كميات القالب"). ويمكن تحسين نتائج تفاعل PCR غير المثالية باستخدام Q-Solution، وهو مُضاف لتضخيم القوالب الغنية بالـ GC، والمُرفق أيضًا مع المجموعة.

تؤدي النتائج الموثوقة إلى توفير الوقت والتكاليف للتطبيقات المتقدمة

يمكن استخدام مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Plus بنجاح في مجموعة واسعة من التطبيقات المتقدمة (انظر الجدول). يضمن إعداد التفاعل البسيط، والإجراء السريع، وسهولة الاستخدام التي توفرها المجموعة الحصول على نتائج قابلة للتكرار بسرعة، دون الحاجة إلى تحسين معايير تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يُعد تطوير المقايسة المتعددة بسيطًا وسهلًا، مما يضمن توفيرًا كبيرًا في الوقت والتكلفة في البحوث الروتينية.

مواصفات بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus

مبدأ

مكونات المجموعة: المزايا
بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus: تضخيم عالي التخصص والحساسية، إعداد في درجة حرارة الغرفة، وقت تنشيط 5 دقائق
محلول تفاعل البوليميراز المتعدد مع عامل MP: تضخيم جميع الأهداف بالتوازي، لا حاجة لتحسين معايير تفاعل البوليميراز المتعدد، بروتوكول واحد لجميع فحوصات البوليميراز المتعدد، إجراء سريع
صبغة كورال لود: سهولة الرؤية أثناء السحب بالماصة، تحميل فوري على الجل، تصوير هجرة الحمض النووي
الحل الأمثل: تضخيم الأهداف الصعبة

تعتمد مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Plus على تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد الخاصة بشركة QIAGEN، وهي متوفرة في شكل مزيج رئيسي سهل الاستخدام. صُممت جميع مكونات المجموعة خصيصًا لضمان أقصى قدر من سهولة الاستخدام والسرعة، مما يوفر نتائج موثوقة باستمرار (انظر الجدول). يحتوي المزيج الرئيسي لتفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد على تراكيز مُحسَّنة مسبقًا من إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase وMgCl₂، بالإضافة إلى dNTPs ومحلول منظم مبتكر لتفاعل البوليميراز المتسلسل.

العوامل الحاسمة لنجاح تفاعل البوليميراز المتعدد (multiplex PCR) - نتائج متسقة وموثوقة لمختلف التطبيقات

يُوفر تفاعل البوليميراز المتعدد (Multiplex PCR) الوقت والمواد الكيميائية للباحثين الذين يُجرون عددًا كبيرًا من تفاعلات البوليميراز، ويُستخدم على نطاق واسع في تطبيقات تحديد النمط الجيني واختبار الحمض النووي (DNA) أو الحمض النووي التكميلي (cDNA) في مختبرات البحث والطب الشرعي والاختبارات الجزيئية. تشمل تطبيقاته تحديد النمط الجيني وتحليل الكائنات المعدلة وراثيًا ومسببات الأمراض، وتضخيم وتحليل التكرارات الميكروية، والكشف عن مناطق تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNPs) أو الطفرات، بالإضافة إلى دراسات الميتاجينوميات. مع ذلك، يُعد تفاعل البوليميراز المتعدد تقنيةً تتطلب مهارةً عالية. يُعد تحسين تفاعل البوليميراز العامل الرئيسي المؤثر في نجاح أو فشل تفاعل البوليميراز المتعدد. قد تؤدي حركية التهجين المتفاوتة لأزواج البادئات المختلفة في تفاعل البوليميراز المتعدد إلى مشاكل مثل انحياز التضخيم. تستخدم البادئات التي ترتبط بكفاءة عالية المزيد من مكونات تفاعل التضخيم، مما يُقلل من إنتاجية نواتج تفاعل البوليميراز الأخرى. نظرًا لكثرة عدد البادئات، يزداد أيضًا خطر تكوين ثنائيات البادئات والارتباط غير النوعي. يؤدي تجاهل هذه التحديات إلى ضعف الحساسية، وتضخيم غير نوعي، وتضخيم متحيز للأهداف المختارة، وبالتالي نتائج غير متسقة وغير مرضية. ويتطلب التغلب على هذه المعوقات خطوات تحسين شاقة ومستهلكة للوقت، مما يؤدي إلى زيادة التكاليف. تُزيل مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit هذه التحديات وتعمل بسهولة من المحاولة الأولى. يضمن التركيب الفريد لمزيج Multiplex PCR Master Mix تضخيمًا عالي النوعية والحساسية، حتى للأهداف التي يصعب تضخيمها. تُمكّن المجموعة من إنشاء جميع فحوصات تفاعل البوليميراز المتعدد (multiplex PCR) بسرعة ونجاح، مما يوفر الوقت والتكاليف بشكل كبير (انظر الشكل "تفاعل البوليميراز المتعدد الناجح دون الحاجة إلى تحسين").

بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus

إن إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase هو شكل مُعدَّل من إنزيم Taq DNA polymerase، ولا يمتلك أي نشاط بوليميرازي في درجات الحرارة المحيطة. هذا يمنع استطالة البادئات غير المُرتبطة بشكل نوعي، وثنائيات البادئات المُتكوّنة في درجات الحرارة المنخفضة أثناء تحضير تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) ودورة PCR الأولية. لا يتطلب الأمر تحسين ظروف التفاعل. كما يُمكن إعداد فحوصات متعددة بسهولة في درجة حرارة الغرفة. يتم تنشيط إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase بحضانة لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية، ويمكن دمج هذه العملية في أي برنامج لجهاز التدوير الحراري الحالي.

محلول منظم تفاعل البوليميراز المتعدد

يحتوي هذا المحلول المنظم الخاص على مزيج مُحسَّن من أيونات البوتاسيوم (K+) والأمونيوم (NH4+)، بالإضافة إلى مُضاف تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الفريد، العامل MP، الذي يزيد من التركيز الموضعي للبادئات عند القالب (انظر الشكل "التزاوج المستقر والفعال"). يتم تقليل التزاوج غير النوعي إلى أدنى حد، وينجح التضخيم المتوازي لجميع الأهداف - حتى مع كميات القالب المنخفضة جدًا (انظر الشكل "نجاح تفاعل البوليميراز المتسلسل 16-plex على نطاق واسع من كميات القالب"). يعمل العامل MP، جنبًا إلى جنب مع أيونات البوتاسيوم (K+) وأيونات أخرى، على تثبيت البادئات المرتبطة بشكل نوعي، مما يسمح بتمديد البادئات بكفاءة بواسطة بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus. يحافظ هذا المحلول المنظم المبتكر على التضخيم النوعي في كل دورة من دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من خلال تعزيز نسبة عالية من ارتباط البادئات النوعي إلى غير النوعي أثناء خطوة التزاوج في كل دورة. بفضل مزيج متوازن بشكل فريد من كلوريد البوتاسيوم (KCl) وكبريتات الأمونيوم (NH4)2SO4، يوفر هذا المحلول المنظم ظروف تزاوج صارمة للبادئات على نطاق أوسع من درجات حرارة التزاوج وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg2+) مقارنةً بمحاليل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) التقليدية. لذلك فإن تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل عن طريق تغيير درجة حرارة التلدين أو تركيز Mg 2+ يكون في الغالب ضئيلاً أو غير مطلوب.

تتضمن المجموعة أيضًا محلول Q-Solution، وهو مُضاف فريد يُعزز تضخيم الأهداف صعبة التضخيم مثل المناطق الغنية بالـ GC أو القوالب ذات البنية الثانوية المعقدة. كما تُوفر المجموعة صبغة CoralLoad Dye متعددة الاستخدامات، والتي تُسهل التعامل مع العينات من خلال تحسين وضوح عملية السحب بالماصة، وتحميل الجل لاحقًا، وتصوير هجرة الحمض النووي (انظر الشكل "إعداد تفاعل البوليميراز المتسلسل بسهولة وتصوير الحمض النووي بسهولة").

إجراء

وعلى النقيض من الأساليب البديلة - التي تفشل حتى بعد التحسين المطول - فإن مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit تُمكّن من النجاح في تفاعل البوليميراز المتعدد في المحاولة الأولى باستخدام بروتوكول واحد (انظر الشكل "تفاعل البوليميراز المتعدد الناجح دون الحاجة إلى التحسين").

تحليل مباشر وسريع للمراحل اللاحقة

يُعدّ تحليل نواتج تفاعل البوليميراز المتعدد (PCR) المُستحصلة باستخدام مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Plus Kit بسيطًا وسريعًا باستخدام طرق متنوعة. سواءً أُجري التحليل باستخدام هلامات الأغاروز، أو أجهزة التسلسل الشعيرية، أو نظام QIAxcel Advanced، يُمكن رؤية جميع المُضخّمات بسهولة، كما يُمكن تمييز الأجزاء الفردية بدقة (انظر الشكل "تفاعل البوليميراز المتعدد الفعال ذو 19 مُضخّمًا").

مجموعة أدوات مريحة

توفر مجموعة QIAGEN Multiplex PCR Plus مزيجًا رئيسيًا مُحسَّنًا وجاهزًا للاستخدام، مما يُسهِّل عملية التحضير. يُوفِّر استخدام هذا المزيج الوقت، ويُبسِّط عملية تحضير التفاعل، ويُحسِّن من دقة النتائج من خلال التخلص من العديد من مصادر أخطاء المعايرة والتلوث، حيث يتم تقليل خطوات المعايرة إلى الحد الأدنى، وتُلغى الحسابات المُرهِقة. كل ما عليك فعله هو إضافة البادئات والقالب لتحضير مزيج التضخيم النهائي. يُمكن تخزين المزيج الرئيسي في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية، مما يُتيح تحضيرًا أسرع لتفاعلات PCR المتعددة. يُمكن تحضير التفاعلات في درجة حرارة الغرفة، مما يضمن سهولة الاستخدام. يتم تنشيط إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase من خلال خطوة حضانة لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية، والتي يُمكن دمجها بسهولة في برامج التدوير الحراري الحالية. يضمن صبغ CoralLoad المُرفق مع المجموعة سهولة أكبر من خلال تحسين وضوح المعايرة أثناء تحضير تفاعل PCR، بالإضافة إلى تحسين رؤية هجرة الحمض النووي على الهلام.

بروتوكول تكميلي للتضخيم المسبق لما يصل إلى 80 هدفًا