شركة كياجين، 206343، مجموعة اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف عن الطفرات من النوع (200)

لتحضير 200 تفاعل بحجم 25 ميكرولتر: مزيج Type-it Multiplex PCR Master Mix، ومحلول Q-Solution بتركيز 5x، وماء خالٍ من إنزيم RNase، وصبغة CoralLoad بتركيز 10x.

سمات

- تحليل ناجح وقابل للتكرار للطفرات المتعددة
- تطوير فحص تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد دون تحسين
- تضخيم مشترك محدد وحساس لجميع الأجزاء
- بروتوكول مُحسَّن للحصول على نتائج سريعة وموثوقة
- تعليمات سهلة للاستخدام مع منصات تحليل البيانات المختلفة

مبدأ

تعتمد مجموعة Type-it Mutation Detect PCR على تقنية QIAGEN Multiplex الخاصة، وهي متوفرة في شكل مزيج رئيسي جاهز للاستخدام. يحتوي المزيج الرئيسي على تراكيز مُحسّنة من إنزيم HotStarTaq Plus DNA Polymerase، وMgCl₂، وdNTPs، بالإضافة إلى محلول تفاعل PCR مبتكر، مُصمم خصيصًا للكشف عن الطفرات باستخدام تقنية PCR المتعددة أو للتضخيم المسبق لمواقع SNP الجينومية. كما يحتوي على المُضاف الجديد Factor MP، بالإضافة إلى مزيج متوازن من الأملاح والمُضافات. تُمكّن هذه المكونات مجتمعةً من تحقيق كفاءة مُتقاربة في عملية التلدين والتمديد لجميع البادئات في التفاعل (انظر الشكل "تلدين مستقر وفعال")، مما يُوفر تضخيمًا مُتعددًا عالي الإنتاجية لجميع القطع بشكل مُتوازي. تتضمن المجموعة بروتوكولات مخصصة للكشف عن الطفرات، بالإضافة إلى نصائح خطوة بخطوة حول كميات القوالب، وأرقام الدورات، وظروف تفاعل البوليميراز المتسلسل، وتفاصيل الأجهزة لمنصات التحليل المختلفة مثل هلامات الأغاروز، وأجهزة التسلسل الشعرية، وجهاز Agilent Bioanalyzer، ونظام QIAxcel Advanced.

يؤدي الجمع بين جميع المكونات الموجودة في المزيج الرئيسي والبروتوكول المخصص إلى تضخيم عالي التخصص لجميع الأجزاء بشكل متوازٍ. ويكون التحليل اللاحق بسيطًا وسهلًا، ويمكن إجراؤه على هلامات الأغاروز، وأجهزة الفصل الكهربائي الآلية، وكذلك عن طريق التسلسل الشعيري عالي الدقة.

محلول منظم للكشف عن الطفرات من النوع Type-it

يضمن محلول Type-it Mutation Detect PCR Buffer كفاءة تضخيم متقاربة لجميع نواتج التضخيم في تجربة متعددة عالية الدقة، ويتيح دمج المزيد من أهداف الطفرات دون فقدان كفاءة التضخيم لأي منها. على عكس كواشف تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدية، يحتوي محلول Type-it Mutation Detect PCR Buffer على مزيج متوازن ومُطور خصيصًا من الأملاح والمواد المضافة لضمان كفاءة متقاربة في عملية التلدين والتمديد لجميع البادئات في التفاعل. بفضل مزيجه المتوازن الفريد من كلوريد البوتاسيوم (KCl) وكبريتات الأمونيوم (NH₄)₂SO₄، يوفر محلول PCR Buffer ظروف تلدين صارمة للبادئات ضمن نطاق أوسع من درجات الحرارة وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) مقارنةً بمحاليل PCR التقليدية. تقل الحاجة بشكل كبير، أو غالبًا ما تُستغنى تمامًا، إلى تحسين تفاعل PCR عن طريق تغيير درجة حرارة التلدين أو تركيز أيونات المغنيسيوم. كما يتم الاستغناء عمليًا عن إجراءات التحسين الشائعة الاستخدام في تفاعل PCR المتعدد. يحتوي المحلول المنظم أيضًا على العامل الاصطناعي MP (انظر الشكل "التزاوج المستقر والفعال")، الذي يسمح بتزاوج البادئات واستطالتها بكفاءة، بغض النظر عن تسلسل البادئات. يزيد العامل MP من التركيز الموضعي للبادئات على قالب الحمض النووي ويثبت البادئات المرتبطة بشكل خاص.

كيو-سوليوشن

تأتي مجموعة Type-it Mutation Detect PCR Kit مزودة بمحلول Q-Solution. يُسهّل هذا المُضاف المبتكر لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) تضخيم القوالب الصعبة عن طريق تعديل سلوك انصهار الحمض النووي. غالبًا ما يُتيح استخدام هذا الكاشف الفريد أو يُحسّن تفاعل البوليميراز المتسلسل غير الأمثل. على عكس ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) ومُضافات تفاعل البوليميراز المتسلسل الأخرى، يُستخدم محلول Q-Solution بتركيز عمل مُحدد مع أي نظام قالب-بادئ، وهو غير سام.

صبغة كورال لود

تأتي مجموعة Type-it Mutation Detect PCR Kit مزودة بصبغة CoralLoad (انظر الشكل "صبغة CoralLoad")، والتي تحتوي على كاشف تحميل الجل وصبغتين لتتبع الجل، مما يُحسّن من وضوح عملية السحب بالماصة ويُسهّل تقدير مسافة هجرة الحمض النووي، بالإضافة إلى تحسين وقت تشغيل جل الأغاروز. عند استخدام صبغة CoralLoad، في تفاعل PCR المتعدد، يمكن تحميل نواتج التضخيم مباشرةً على جل الأغاروز أو نظام QIAxcel Advanced دون إضافة محلول التحميل مسبقًا. لا تتداخل صبغات CoralLoad مع معظم التطبيقات الإنزيمية اللاحقة. مع ذلك، وللحصول على نتائج قابلة للتكرار، يُنصح بتنقية نواتج PCR قبل المعالجة الإنزيمية. في حال استخدام أجهزة التسلسل الشعيرية للكشف، يجب عدم استخدام صبغة CoralLoad.

إجراء

تتضمن مجموعة Type-it Mutation Detect PCR Kit بروتوكولات مخصصة لتطبيقات محددة، مُحسّنة للتضخيم المتزامن والكشف اللاحق عن المواقع الجينية الحاملة للطفرات أو تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNPs) لضمان نتائج موثوقة للتحليل الروتيني أو إنشاء فحوصات جديدة. يمكن إجراء التفاعلات في درجة حرارة الغرفة، مما يضمن مزيدًا من الراحة وسهولة الاستخدام.

طريقة سريعة وبسيطة للحصول على نتائج موثوقة في تحديد النمط الجيني

تتيح مجموعة Type-it Mutation Detect PCR Kit تطويرًا سريعًا وسهلًا لتحليلات متعددة الأهداف، مما يضمن نتائج دقيقة وقابلة للتكرار في تحديد النمط الجيني. سواءً كان الهدف هو الكشف عن عمليات الانتقال، أو الحذف، أو الإدخال، أو التضخيم المسبق للمواقع الجينية لتحليل تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNP) باستخدام طرق مثل SNaPshot (Applied Biosystems)، ما عليك سوى إضافة القالب والبادئات، وتشغيل برنامج جهاز التدوير الحراري وفقًا للبروتوكول الأمثل. يحتوي مزيج التفاعل على جميع الكواشف اللازمة لتفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد الأهداف الخاص بالطفرات، مما يتيح الحصول على نتائج دقيقة دون الحاجة إلى إجراءات تحسين مطولة، مقارنةً بالطرق الحالية (انظر الشكل "تحليل النمط الجيني الناجح القائم على تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد الأهداف").

توفير الوقت والتكاليف بفضل الإجراءات البسيطة

تتطلب بعض الدراسات تحليل عدد كبير من الطفرات المختلفة لجين معين مرتبط بمرض ما (مثل الحذف، أو الانتقال، أو الإدخال)، مما يستلزم عددًا كبيرًا من تفاعلات البلمرة المتسلسلة (PCR) عند إجراء تحليل أحادي أو منخفض التعدد، وبالتالي زيادة التكاليف ووقت التحليل. تضمن مجموعة Type-it Mutation Detect PCR Kit كفاءة تضخيم متقاربة لجميع المنتجات المضخمة في تجربة متعددة عالية التعدد، وتتيح دمج المزيد من أهداف الطفرات، مما يضمن توفيرًا كبيرًا في الوقت والتكلفة (انظر الشكل: الكشف الحساس عن جين متحور مرتبط بالسرطان).

التضخيم المسبق الموثوق به للنيوكليوتيدات المفردة المتغيرة

تُعدّ مجموعة Type-it Mutation Detect PCR Kit مناسبةً للغاية أيضًا للتضخيم المسبق للنيوكليوتيدات المفردة المتعددة (SNPs) باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد (مثل نظام SNaPshot من شركة Applied Biosystems). وقد تفوّقت هذه المجموعة على مجموعات أخرى من موردين مختلفين، وتُقدّم نتائج موثوقة باستمرار، دون الحاجة إلى إجراءات تحسين معقدة (انظر الشكل "التضخيم المسبق الفائق للنيوكليوتيدات المفردة").

التطبيقات

- تحديد مواقع الأمراض
- تحليل الكائنات المعدلة وراثيًا
- تصنيف النباتات أو الحيوانات المعدلة وراثيًا

تُستخدم مجموعة Type-it Mutation Detect PCR Kit لتحليل الطفرات، والحذف، والإدخال، والتضاعف، والانتقالات، وللتضخيم المسبق لـ SNP (مثل مجموعة SNaPshjot Multiplex Kit)، وتُستخدم في مجالات بحثية متنوعة مثل: