شركة كياجين، 206544، مجموعة اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الدقة من النوع الأول (400)

لإجراء تفاعلات بحجم 400 × 25 ميكرولتر: 4 × 1.3 مل من مزيج التفاعل الرئيسي HRM PCR بتركيز 2x (يحتوي على بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus، وصبغة EvaGreen، وتركيز مُحسَّن من محلول Q، وdNTPs، وMgCl2) وماء خالٍ من RNase
عرض المزيد

سمات

- الكشف الموثوق والدقيق عن الاختلافات الطفيفة في التسلسل
- مناسب للغاية للاستخدام مع أي جهاز ركوب دراجات مزود بإمكانيات مراقبة معدل ضربات القلب
- منحنيات ذوبان مميزة بسبب صبغة إيفاجرين الفلورية الجديدة
- سهولة تطوير فحوصات التنميط الجيني الجديدة والموثوقة بتقنية تحليل الانصهار عالي الدقة
- تنسيق مزيج رئيسي ملائم وبروتوكولات محسّنة

تفاصيل المنتج

توفر مجموعة Type-it HRM PCR حلاً موثوقًا لتحديد النمط الجيني بسرعة ودقة عبر تحليل HRM. تم تحسين المجموعة لتمكين التحليل الناجح حتى للمواقع الجينومية التي يصعب تضخيمها. تُعد المجموعة مناسبة جدًا لفحص الطفرات، ويمكن استخدامها لفحص العينات بحثًا عن طفرات غير معروفة. تطوير فحوصات جديدة لتحديد النمط الجيني بتقنية HRM سهل ومباشر. تضمن المجموعة باستمرار منتجات تضخيم محددة، وتقليل التضخيم غير المحدد، ونتائج موثوقة - لم يعد تحسين معايير تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الذي يستغرق وقتًا طويلاً ضروريًا. يؤدي هذا إلى التوحيد والمرونة، بالإضافة إلى توفير كبير في الوقت والتكلفة. تتوافق المجموعة مع جميع أجهزة الوقت الحقيقي المناسبة لتحليل HRM، مثل Rotor-Gene Q وRotor-Gene 6000 وLightCycler 480 وApplied Biosystems 7500 Fast System.

أداء

تم التحقق من صحة مجموعة أدوات Type-it HRM PCR لتحديد الاختلافات في التسلسل بدقة، وهي مناسبة للغاية للتمييز بين الأليلات بشكل قاطع باستخدام تقنية HRM المبتكرة. بفضل تقنية HRM، يمكن الكشف عن الاختلافات في التسلسل، حتى المعقدة منها، والتي تظهر في تطبيقات التنميط الجيني الصعبة، وتوصيفها بسهولة ويسر (انظر الشكل "التنميط الجيني عالي الدقة").

الكشف الموثوق والدقيق عن الاختلافات الطفيفة في التسلسل

يحتوي المزيج الرئيسي المرفق مع المجموعة على صبغة EvaGreen الفلورية الجديدة التي ترتبط بالحمض النووي المزدوج، ويتضمن محلولًا منظمًا مُحسَّنًا لتحليل الذوبان عالي الدقة (HRM)، وإنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus، ومحلول Q، و dNTPs. تضمن هذه المكونات مجتمعةً خصوصية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتوفر نتائج موثوقة، حتى مع المواقع الجينومية المعقدة. تفوقت مجموعة Type-it HRM PCR على المجموعات التي تم اختبارها من موردين آخرين، وتُمكّن من تضخيم حتى أدق اختلافات التسلسل. يضمن التركيب الفريد لمحلول Type-it HRM PCR المنظم ارتباطًا دقيقًا وموجهًا للغاية للبادئات مقارنةً بمزيجات HRM الرئيسية الأخرى المتوفرة تجاريًا (انظر الشكل "تضخيم عالي التخصص وناجح للمواقع الجينومية المعقدة"). على عكس مجموعات الاختبار من موردين آخرين، توفر مجموعة Type-it HRM PCR أداءً ثابتًا من المحاولة الأولى على جميع أجهزة التحليل في الوقت الحقيقي التي تم اختبارها، مما يضمن دقة عالية في الكشف حتى عن تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة من الفئة الرابعة (انظر الشكل "النمط الجيني الناجح لتعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة من الفئة الرابعة A/T") والطفرات الجينية (انظر الشكل "النمط الناجح للطفرات الجينية"). وتؤدي هذه المزايا أيضًا إلى توفير كبير في الوقت والتكلفة من خلال تقليل عدد العينات التي تحتاج إلى إعادة اختبار.

فحص سريع وسهل للطفرات

يمكن إجراء فحص طفرات عالي الموثوقية باستخدام مجموعة Type-it HRM PCR. يتم الكشف بسهولة عن طفرات الجينات غير المعروفة (الإدخالات والحذف) وتمييزها بشكل موثوق، مما ينتج عنه منحنيات ذوبان مميزة (انظر الشكل "فحص الطفرات الناجح").

مبدأ

المحتويات: الفوائد
مزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الدقة (HRM PCR Master Mix) بتركيز 2x: يُغني عن الحاجة إلى تحسينات في تطوير فحوصات جديدة. مُصمم خصيصًا لتحليل الطفرات والنيوكليوتيدات المفردة المتغيرة (SNPs) بتقنية HRM. مُخصص للاستخدام مع جميع أجهزة التدوير الحراري المناسبة لتحليل HRM. إعداد تفاعل سهل، مما يقلل من أخطاء استخدام الماصة.
بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus: تضخيم عالي التخصص، إعداد سريع وسهل للتفاعل في درجة حرارة الغرفة
محلول Type-it HRM PCR: منحنيات ذوبان مميزة، زيادة في خصوصية التضخيم
الحل الأمثل: يُحسّن تضخيم القوالب الصعبة
صبغة إيفاجرين: صبغة جديدة مشبعة ترتبط بالحمض النووي المزدوج السلسلة، تحليل منحنى ذوبان مميز

يُعدّ تحليل الذوبان عالي الدقة (HRM) طريقة تحليلية تُجرى في أنبوب مغلق بعد تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وقد حظيت باهتمام علمي واسع. يُصنّف تحليل الذوبان عالي الدقة نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل ثنائية السلاسل بناءً على سلوك تفككها (انصهارها) أثناء تحولها من الحمض النووي ثنائي السلاسل (dsDNA) إلى الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) مع ارتفاع درجة الحرارة. ويمكن التمييز بين نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل وفقًا للتسلسل، أو الطول، أو محتوى GC، أو تكامل السلاسل، وصولًا إلى تغييرات زوج القاعدة الواحد. ويمكن تحليل اختلافات التسلسل غير المعروفة سابقًا، وحتى المعقدة منها كما هو الحال في تطبيقات التنميط الجيني الصعبة، بسهولة (انظر الشكل "التنميط الجيني عالي الدقة"). يُعدّ تحليل الذوبان عالي الدقة أسهل وأقل تكلفة من تحليل التنميط الجيني القائم على المجسات، وعلى عكس الطرق التقليدية، فإنه يمنع تلوث نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل.

تضمن مكونات المجموعة الفريدة تضخيمًا عالي التخصص (انظر الجدول).

صبغة إيفاجرين الجديدة لمنحنيات انصهار مميزة

تحتوي مجموعة Type-it HRM PCR على صبغة EvaGreen، وهي صبغة فلورية مشبعة من الجيل الثالث ترتبط بشكل انتقائي بالحمض النووي المزدوج. على عكس صبغة SYBR® Green I التقليدية، يمكن استخدام EvaGreen بتراكيز أعلى دون تثبيط تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)، وتُظهر تقاربًا متساويًا للارتباط بالمناطق الغنية بالـ GC والمناطق الغنية بالـ AT دون أي تفضيل واضح للتسلسل. هذا يجعل EvaGreen مناسبًا للغاية لتحليل HRM لجميع أنواع منتجات PCR، مما يُتيح الحصول على منحنيات ذوبان مميزة بفضل إمكانية رؤية الاختلافات الفلورية الأقل، وبالتالي ضمان نتائج موحدة.

مزيج رئيسي مُحسَّن لتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الدقة (HRM PCR)

يتكون مزيج التفاعل الرئيسي HRM PCR من بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus ونظام محلول منظم مبتكر لتفاعل HRM PCR، وكلاهما يُمكّن من تضخيم عالي التخصص ورسم منحنيات ذوبان واضحة حتى للمواقع الجينومية الصعبة مثل تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة من الفئة الرابعة (انظر الشكل "التنميط الجيني الناجح لتعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة من الفئة الرابعة A/T"). يضمن هذا المزيج تضخيمًا نوعيًا لناتج تفاعل البوليميراز المتسلسل المطلوب، ويقلل من إنتاج نواتج غير نوعية وتكوين ثنائيات البادئات، إن لم يمنعها تمامًا (انظر الشكل "التنميط الناجح للطفرات الجينية").

يحافظ المحلول المنظم المبتكر (المُضمّن في المزيج الرئيسي) على التضخيم النوعي في كل دورة من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) من خلال تعزيز نسبة عالية من ارتباط البادئات النوعية إلى غير النوعية خلال مرحلة التلدين في كل دورة. وبفضل تركيبة متوازنة فريدة من كلوريد البوتاسيوم (KCl) وكبريتات الأمونيوم (NH₄₂SO₄)، يوفر هذا المحلول ظروف تلدين صارمة للبادئات ضمن نطاق أوسع من درجات حرارة التلدين وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg²⁺) مقارنةً بالمحاليل المنظمة التقليدية لتفاعل البوليميراز المتسلسل. ولذلك، غالبًا ما يكون تحسين تفاعل البوليميراز المتسلسل عن طريق تغيير درجة حرارة التلدين أو تركيز أيونات المغنيسيوم ضئيلاً أو غير ضروري.

مناسب لمواقع الطفرات الصعبة

تُعدّ مجموعة Type-it HRM PCR نظامًا فعالًا للكشف السهل عن مواقع الطفرات المعقدة (انظر الشكل "تضخيم عالي التخصص وناجح للمواقع الجينومية المعقدة"). يصعب تضخيم الطفرات أو تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNPs) الموجودة في المناطق الغنية بالـ GC أو المناطق ذات البنية الثانوية العالية باستخدام محاليل HRM PCR التقليدية. يحتوي المزيج الرئيسي 2x HRM PCR على مُضاف PCR المبتكر Q-Solution، بتركيز مُحدد للمساعدة في التغلب على هذه التحديات. يُحسّن Q-Solution تفاعل PCR عن طريق تعديل سلوك انصهار الحمض النووي، مما يؤدي إلى تضخيم ناجح حتى لتسلسلات الهدف المعقدة دون الحاجة إلى تحسين.

إجراء

تتضمن مجموعة Type-it HRM PCR بروتوكولات مخصصة لتطبيقات محددة، مُحسّنة مسبقًا للاستخدام مع أجهزة التدوير الحراري المختلفة مثل Rotor-Gene Q وRotor-Gene 6000 وLightCycler 480. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام نظامي Applied Biosystems 7500 Fast System وApplied Biosystems 7900 مع البروتوكولات المُحسّنة المُرفقة مع المجموعة. يتوفر بروتوكول مُفصّل على موقعنا الإلكتروني.

إجراء سريع الدورة واختبارات HRM سهلة التطوير للحصول على نتائج مباشرة

تضمن الميزات الفريدة لمحلول Type-it HRM PCR Buffer والبروتوكولات المُحسّنة المُرفقة مع المجموعة نتائج ناجحة لتحديد النمط الجيني بتقنية HRM من المحاولة الأولى. لا يتطلب الأمر تحسينًا مُطوّلًا لمعايير التفاعل، ويمكن توحيد وتطبيق فحوصات تحديد النمط الجيني بتقنية HRM الجديدة بسرعة وسهولة في البحوث الروتينية (انظر الشكل "تحليل HRM ناجح دون الحاجة إلى تحسين"). بالإضافة إلى ذلك، يزيد بروتوكول التدوير السريع لمجموعة Type-it HRM PCR Kit من الإنتاجية عن طريق تقصير أوقات تشغيل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، مما يُتيح الحصول على نتائج دقيقة بشكل أسرع.

مجموعة أدوات مريحة

تأتي المجموعة في شكل مزيج رئيسي مُحسَّن وجاهز للاستخدام، مما يوفر راحة أكبر. يُسهم استخدام المزيج الرئيسي في توفير الوقت، وتبسيط عملية تحضير التفاعل، وزيادة دقة النتائج من خلال التخلص من العديد من مصادر أخطاء المعايرة والتلوث المحتملة، حيث يتم تقليل خطوات المعايرة والاستغناء عن الحسابات المُرهقة. يُعد تحضير التفاعل في درجة حرارة الغرفة باستخدام المزيج الرئيسي سريعًا وسهلاً. يتم تنشيط إنزيم بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus (الموجود في المزيج الرئيسي) من خلال خطوة حضانة لمدة 5 دقائق عند درجة حرارة 95 درجة مئوية، والتي يُمكن دمجها بسهولة في برامج التدوير الحراري الحالية.

التطبيقات

- الكشف عن عمليات الحذف والإدخال والانتقالات
- فحص الطفرات الجينية
- تحديد النمط الجيني للنيوكليوتيدات المفردة
- الكشف عن المتغيرات الميكروبية وتمييزها

- تحديد أنواع الأمراض ومواضع السرطان
- اكتشاف المؤشرات الحيوية
- دراسات ارتباط الأمراض
- تصنيف النباتات والحيوانات المعدلة وراثيًا
- الكشف عن مسببات الأمراض وتحديد النمط الجيني

يمكن استخدام مجموعة Type-it HRM PCR Kit في العديد من التطبيقات مثل:

تُعد مجموعة أدوات Type-it HRM PCR أداة عالمية قابلة للتطبيق في مجموعة واسعة من المجالات البحثية، بما في ذلك: