شركة كياجين، 207045، مجموعة كوانتيتيك للنسخ الكامل (100)

لتحضير 100 تفاعل بحجم 50 ميكرولتر لكل منها: 100 ميكرولتر من إنزيم T-Script، 400 ميكرولتر من محلول T-Script، 100 ميكرولتر من إنزيم الربط 1، 100 ميكرولتر من إنزيم الربط 2، 200 ميكرولتر من كاشف الربط، 600 ميكرولتر من محلول الربط، 100 ميكرولتر من بوليميراز الحمض النووي REPLI-g Midi، 2 × 1.45 مل من محلول تفاعل REPLI-g Midi

سمات

- إنتاجية عالية من الحمض النووي التكميلي (cDNA) لتحليل qPCR غير المحدود والأرشفة
- تضخيم متساوٍ لجميع مناطق الحمض النووي المكمل (cDNA) وجميع مناطق النسخ
بروتوكول سريع وسهل مع كواشف مُحسَّنة

تفاصيل المنتج

تُمكّن مجموعة QuantiTect Whole Transcriptome Kit من التضخيم المسبق والنسخ العكسي لكميات محدودة من الحمض النووي الريبوزي (RNA) لإنتاج كميات كبيرة من الحمض النووي التكميلي (cDNA) لتحليل التعبير الجيني غير المحدود باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR). يضمن البروتوكول المُحسّن إجراءً سريعًا وسهلاً. تتكون المجموعة من مجموعة كاملة من الإنزيمات والمحاليل المنظمة لتضخيم النسخ الكامل (WTA). يسمح التعديل المبتكر لتقنية بوليميراز Phi 29 بإنتاج ما يصل إلى 40 ميكروغرام من الحمض النووي التكميلي (cDNA) من 1 نانوغرام فقط من الحمض النووي الريبوزي (RNA). تضمن الكفاءة العالية الفريدة لهذا البوليميراز إنتاج الحمض النووي التكميلي (cDNA) الذي يحتوي على أهداف مُضخّمة بشكل موحد لضمان تحليل موثوق للتعبير الجيني في تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR).

أداء

المادة الأولية: وقت التضخيم
10 نانوغرام من الحمض النووي الريبي: ساعتان
10 نانوغرام من الحمض النووي الريبي: 8 ساعات

توفر مجموعة QuantiTect Whole Transcriptome Kit تضخيمًا متجانسًا للغاية لجميع النسخ، وهو أمر ضروري لتحليل موثوق للتعبير الجيني. يتم تضخيم جميع نسخ mRNA بتمثيل متساوٍ في منطقتي 5' و3' (انظر الشكل "تضخيم متساوٍ لمنطقتي 5' و3'"). يوضح الشكل "الحفاظ على نمط النسخ" الحفاظ على نمط النسخ، حيث تتم مقارنة cDNA المُضخّم بتقنية WTA والمُحضّر باستخدام مجموعة QuantiTect Whole Transcriptome Kit مع cDNA غير المُضخّم والمُحضّر باستخدام إنزيم النسخ العكسي.

يمكن الحصول على كميات عالية وقابلة للتكرار من الحمض النووي التكميلي (cDNA) تصل إلى 40 ميكروغرامًا (انظر الشكل "كميات الحمض النووي التكميلي القابلة للتكرار"). يتيح ذلك إجراء تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) في الوقت الحقيقي بشكل غير محدود مع قيم عتبة (CT) عالية التكرار (انظر الجدول والشكل "تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي الموثوق"). إضافةً إلى ذلك، ولأن الحمض النووي التكميلي أكثر استقرارًا من الحمض النووي الريبي (RNA)، يمكن حفظه بأمان لإجراء دراسات مستقبلية.

مبدأ

قد يكون تحليل التعبير الجيني محدودًا بسبب صغر حجم العينة البيولوجية المتاحة. باستخدام مجموعة QuantiTect Whole Transcriptome Kit، يصبح من الممكن إجراء تحليلات تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (PCR) غير محدودة لعينات صغيرة وثمينة. صُممت مجموعة QuantiTect Whole Transcriptome Kit خصيصًا لتضخيم كامل النسخ الجيني من كمية ضئيلة تصل إلى 1 نانوغرام من الحمض النووي الريبوزي (RNA)، أي ما يعادل حوالي 50 خلية. ويمكن استخدام كميات أقل من الحمض النووي الريبوزي، وذلك حسب جودته ووفرة النسخة الجينية المراد تحليلها.

تحتوي مجموعة QuantiTect Whole Transcriptome على إنزيم النسخ العكسي، وإنزيم بلمرة الحمض النووي، ومحاليل منظمة وكواشف مُحسَّنة لتضخيم جميع النسخ في عينة الحمض النووي الريبوزي (RNA). تدمج هذه المجموعة عملية تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) مع جودة تقنية REPLI-g المُثبتة لتضخيم التسلسل غير المتحيز. يستخدم تضخيم REPLI-g تقنية التضخيم متعدد الإزاحة (MDA)، التي تُجري تضخيمًا متساوي الحرارة للتسلسل باستخدام إنزيم بلمرة الحمض النووي ذي الكفاءة العالية (انظر الشكل "تضخيم النسخ الكامل"). تضمن هذه التقنية تضخيمًا غير متحيز لجميع مناطق النسخ، حتى نهايات 5'، مما يوفر كمية غير محدودة من الحمض النووي التكميلي (cDNA) المناسب جدًا لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR).

التطبيقات

يُستخدم الحمض النووي التكميلي (cDNA) المُحضر باستخدام مجموعة QuantiTect Whole Transcriptome Kit في تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) باستخدام مجموعات QuantiFast أو Rotor-Gene، ويمكن حفظه لتحليله لاحقًا. لا يُناسب هذا الحمض النووي التكميلي (cDNA) تحليل المصفوفات الدقيقة. لتضخيم الجينوم الكامل من عينات صغيرة أو ثمينة، تُقدم QIAGEN مجموعات REPLI-g وخدمة REPLI-g. يتميز التضخيم بتجانس عالٍ مع أدنى حد من التحيز التسلسلي، مما يوفر حمضًا نوويًا مناسبًا لتطبيقات مثل التنميط الجيني والتهجين الجينومي المقارن (CGH).