شركة كياجين، 208014، مجموعة تفاعل البوليميراز المتسلسل UCP SYBR Green (500)

5 × 1 مل من مزيج UCP SYBR Green PCR MasterMix (2x)؛ 1 × 200 ميكرولتر من محلول تخفيف قالب UCP Yellow؛ 2 × 250 ميكرولتر من صبغة UCP ROX؛ 4 × 1.9 مل من ماء UCP PCR

سمات

- تعمل الكواشف المستنفدة من الأحماض النووية على منع التشويش الناتج عن الحمض النووي المتبقي.
- يمنع التحكم المرئي في عملية السحب بالماصة حدوث أخطاء في عملية السحب.
- قوة استثنائية للمثبطات للحصول على نتائج موثوقة من جميع المواد الأولية الشائعة
- مريح وقابل للأتمتة بفضل إعداد التفاعل في درجة حرارة الغرفة
- آلية بدء التشغيل السريع المحمية بالحماية والوسيطة بالأجسام المضادة لتحقيق خصوصية فائقة

تفاصيل المنتج

توفر مجموعة UCP SYBR Green PCR مزيجًا رئيسيًا فائق النقاء وسهل الاستخدام لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عالي الحساسية والدقة في الوقت الحقيقي باستخدام أي قالب DNA أو cDNA. تُطبَّق عمليات مُخصصة لضمان إنتاج المزيج الرئيسي بنقاء فائق، مما يقلل من تلوث الخلفية بالحمض النووي. يحتوي المزيج الرئيسي أيضًا على مُتتبِّع ألوان مُدمج لتحديد عملية المعايرة الصحيحة. بفضل مقاومته الفائقة للمثبطات وخيار القياس الكمي، تُعد مجموعة UCP SYBR Green PCR خيارًا مثاليًا للتطبيقات الميكروبية الخالية من التلوث، مثل تحليل تسلسل 16S (للبكتيريا) أو تسلسل 18S (للفطريات). كما يُوصى بشدة باستخدام هذه المجموعة في تطبيقات مراقبة الجودة.

يُعدّ طقم UCP Probe PCR حلاً فريداً لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي القائم على المجسات، حيث يجمع بين الأداء المتميز والإنتاج فائق النظافة، وخالٍ من أي بقايا حمض نووي. ويُناسب مزيج الإنتاج فائق النظافة بشكل خاص التطبيقات التي تتطلب كواشف خالية من الأحماض النووية الملوثة، مثل مراقبة الجودة أو تحليل الميكروبيوم. وتشمل مزاياه الأخرى آلية بدء تشغيل ساخنة فريدة بوساطة الأجسام المضادة، ومؤشراً مرئياً للتحكم في عملية المعايرة، وإمكانية إعداد التفاعل في درجة حرارة الغرفة، ومقاومة عالية للمثبطات.

أداء

تتميز كواشف UCP PCR Kits فائقة النقاء والخالية من الأحماض النووية بملاءمتها الفريدة للعمليات المعرضة لتلوث الحمض النووي الخلفي. تعمل عمليات الإنتاج فائقة النقاء لدينا على تقليل التلوث المحتمل بالحمض النووي المتبقي من الكائن المضيف للتعبير الجيني أو مصادر أخرى. تخضع جميع مكونات المجموعة لاختبارات صارمة للكشف عن الحمض النووي البكتيري والفطري باستخدام فحوصات PCR عامة لتسلسلات ترميز 16S و18S rRNA. يُوصى بشدة باستخدام هذه المجموعات للتطبيقات التي تتطلب كواشف فائقة النقاء، مثل الاختبارات الميكروبية، وإجراءات مراقبة الجودة، وتحليل وتسلسل الميكروبيوم/الميتاجينوم، واختبار عينات الكتلة الحيوية المنخفضة.

تتيح هذه المجموعات أيضًا إمكانية القياس الكمي ضمن نطاق خطي واسع يصل إلى ما يعادل جينومين من بكتيريا الإشريكية القولونية (16S) أو خمسة جينومات من المبيضات البيضاء (18S)، وذلك بفضل تركيبة المزيج الرئيسي المُحسّنة. ومن أبرز مزايا مجموعات UCP PCR الأخرى مقاومتها الفائقة للمثبطات أو تغيرات محتوى GC، وإمكانية المعايرة البصرية المتكاملة، والإعداد في درجة حرارة الغرفة، ودورات التفاعل فائقة السرعة، وكلها عوامل تُحسّن كفاءة عمليات التحليل الميكروبي.

مبدأ

توفر مجموعات UCP PCR دقة عالية باستخدام آلية بدء ساخن فعّالة. عند درجات الحرارة المنخفضة، يُحافظ على بوليميراز الحمض النووي في حالة غير نشطة بواسطة جسم مضاد ومادة حماية جديدة تُثبّت المُركّب (انظر الشكل "مبدأ آلية البدء الساخن المحمية بمادة الحماية"). تمنع آلية البدء الساخن الصارمة هذه أي نشاط إنزيمي في درجات الحرارة المحيطة، مما يسمح بإعداد التفاعل دون الحاجة إلى الثلج أو على الأجهزة. يُفعّل الإنزيم بالكامل بعد خطوة الحضانة لمدة دقيقتين عند 95 درجة مئوية، ويبدأ التضخيم بدقة عالية من الدورة الأولى. كما تمنع عملية البدء الساخن استطالة البادئات غير المُرتبطة بشكل نوعي وثنائيات البادئات في الدورة الأولى، مما يضمن تفاعل PCR عالي الدقة وقابل للتكرار.

يُستخدم صبغان خاملان مدمجان لتوفير تحكم مرئي في عملية المعايرة. يحتوي المزيج الرئيسي لـ UCP على صبغة زرقاء خاملة، بينما يحتوي محلول تخفيف قالب UCP الأصفر على صبغة صفراء خاملة. عند إضافة الحمض النووي القالب، المخفف بمحلول تخفيف قالب UCP الأصفر، إلى المزيج الرئيسي، يتغير لون المحلول من الأزرق إلى الأخضر، مما يوفر مؤشرًا مرئيًا على صحة عملية المعايرة وإعداد التفاعل (انظر الشكل "التحكم المدمج في المعايرة").

إجراء

تحتوي مجموعات UCP PCR على مزيج رئيسي مُركّز مرتين وجاهز للاستخدام، وماء UCP PCR، وصبغة UCP ROX للاستخدام الاختياري. توفر بروتوكولات التدوير السريع للغاية المكونة من خطوتين نتائجك في أقل من ساعة. يمكن استخدام المجموعة مع أي جهاز تدوير في الوقت الحقيقي. تُقدّم صبغة UCP ROX في أنبوب منفصل، ويمكن إضافتها في حال استخدام جهاز تدوير يتطلب ROX كصبغة مرجعية سلبية. تُقدّم المجموعة نتائج متسقة للغاية مع مختلف أجهزة التدوير من حيث الحساسية، وقابلية التكرار، والكفاءة، على الرغم من اختلاف قدرات التدوير السريع.

لزيادة تبسيط سير عمل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، نوصي باستخدام جهاز QIAgility لإعداد التفاعلات الآلية.

التطبيقات

تُعدّ مجموعات UCP PCR مثاليةً للإجراءات التي تتطلب نقاءً ودقةً عاليتين، مثل الاختبارات الميكروبية، ودراسات الميكروبيوم/الميتاجينوم، ومراقبة الجودة، وغيرها من التحليلات الكمية للأحماض النووية. توفر هذه المجموعة كفاءةً عاليةً، لا سيما في عمليات التحليل الميكروبي، مثل تحديد كمية الحمض النووي الميكروبي مقابل الحمض النووي للمضيف، قبل تحضير مكتبة NGS من المسحات أو سوائل الجسم. كما يُوصى بها بشدة للكشف عن الحمض النووي الملوث أو المتبقي وتحديد كميته، مثل الحمض النووي البكتيري أو الفطري أو أي حمض نووي للمضيف، في إجراءات مراقبة الجودة أو عمليات الإنتاج البيولوجي. يمكن استخدام هذه المجموعة مع أي جهاز تدوير جزيئي شائع الاستخدام.

لتحليل الميكروبيوم، تقدم QIAGEN مجموعة من المنتجات المتخصصة بما في ذلك مجموعات DNeasy Power Soil Pro لاستخلاص العينات، ومجموعات UCP Multiplex و HiFidelity لتفاعل البوليميراز المتسلسل النهائي، ولوحات QIAseq 16S/ITS للتسلسل من الجيل التالي، وبرنامج CLC Microbial Genomics Pro Suite للتحليل المعلوماتي الحيوي.