شركة كياجين، 210210، مجموعة كياجين ون ستيب RT-PCR (25)

لـ 25 تفاعلًا بحجم 50 ميكرولتر: مزيج إنزيم QIAGEN OneStep RT-PCR (1 × 50 ميكرولتر)، ومحلول منظم QIAGEN OneStep RT-PCR بتركيز 5x (1 × 250 ميكرولتر)، ومزيج dNTP (1 × 50 ميكرولتر، 10 ملي مولار لكل منها)، ومحلول Q بتركيز 5x (1 × 400 ميكرولتر)، وماء خالٍ من RNase (1 × 1.9 مل).

سمات

- إعداد سريع وسهل باستخدام أنبوب واحد
- تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) الفعال بخطوة واحدة لأي قالب من الحمض النووي الريبي (RNA) دون الحاجة إلى تحسين
- مزيج إنزيمي فريد لتحقيق دقة وحساسية عاليتين
- مزيج متوازن من الإنزيمات مع محلول منظم مُحسَّن للنسخ العكسي

مبدأ

محتويات مجموعة QIAGEN OneStep RT-PCR: الميزات
بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq: منتجات عالية التخصص
إنزيمات النسخ العكسي Sensiscript و Omniscript: نطاق واسع من كميات الحمض النووي الريبي (1 بيكوغرام - 2 ميكروغرام) حساسية عالية
محلول منظم لتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي بخطوة واحدة: لا يحتاج إلى تحسينات تُذكر، لا تثبيط لتفاعل البوليميراز المتسلسل بواسطة إنزيمات النسخ العكسي، تثبيط إنزيمات الريبونوكلياز.
محلول Q: يُسهّل تضخيم القوالب الغنية بالـ GC

تم تصميم مجموعة QIAGEN OneStep RT-PCR لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) بخطوة واحدة سهلة وحساسة باستخدام أي قالب من الحمض النووي الريبي (RNA).

يحتوي مزيج إنزيمات QIAGEN OneStep RT-PCR على تركيبة إنزيمية مُصممة خصيصًا لكلٍ من النسخ العكسي وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يضمن المزيج الفريد من إنزيمات النسخ العكسي Omniscript وSensiscript، ذات الألفة العالية لقوالب الحمض النووي الريبي (RNA)، نسخًا عالي الكفاءة والحساسية لكميات الحمض النووي الريبي تتراوح من 1 بيكوغرام إلى 2 ميكروغرام. بعد النسخ العكسي، تُسخّن التفاعلات إلى 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة لتنشيط إنزيم HotStarTaq DNA Polymerase وتعطيل إنزيمات النسخ العكسي في الوقت نفسه. تُزيل هذه الخطوة، المعروفة باسم "البدء الساخن"، نواتج التضخيم غير النوعية مثل ثنائيات البادئات، وتقلل من التلطخ الخلفي، مما يضمن تفاعل RT-PCR عالي الحساسية وقابل للتكرار (انظر الشكلين "تفاعل RT-PCR عالي التخصص باستخدام كميات قليلة من القالب" و"الكشف الفعال عن الحمض النووي الريبي الفيروسي").

نطاق واسع من درجات حرارة التلدين

تعتمد درجة حرارة التلدين المثلى للبادئات على التركيب القاعدي (أي نسبة النيوكليوتيدات A وT وG وC)، وتركيز البادئات، وبيئة التفاعل الأيونية. تحتوي محاليل QIAGEN PCR على كلٍ من أيونات البوتاسيوم (K+) والأمونيوم (NH4+)، وتُنتج كميات كبيرة من نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) النوعية ضمن نطاق واسع من درجات حرارة التلدين (انظر الشكل "زيادة نوعية تلدين البادئات"). تتحقق هذه النوعية من خلال زعزعة استقرار البادئات غير المرتبطة بشكل نوعي، مما يوفر بيئة تفاعل أكثر استقرارًا ويُغني عن الحاجة إلى ضبط درجة حرارة التلدين بدقة. في المقابل، يكون نطاق درجات حرارة التلدين المثلى لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أصغر وأقل قابلية للتنبؤ عند استخدام محلول PCR أو محلول RT-PCR أحادي الخطوة الذي يحتوي على أيونات البوتاسيوم (K+) فقط (على سبيل المثال، محاليل الموردين D وT)، كما هو موضح في الشكل "تأثير درجة حرارة التلدين على النوعية".

تم تطوير محلول QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer خصيصًا لتمكين كلٍ من النسخ العكسي الفعال وتضخيم الحمض النووي بتقنية PCR. يحتوي المحلول على إضافات مبتكرة تمنع تثبيط تضخيم الحمض النووي بواسطة إنزيمات النسخ العكسي، وهي مشكلة شائعة في تفاعل RT-PCR أحادي الخطوة. يضمن المحلول ارتباطًا نوعيًا للبادئات ضمن نطاق واسع من درجات الحرارة وتركيزات أيونات المغنيسيوم (Mg2+)، مما يوفر تفاعل RT-PCR قويًا وعالي الكفاءة من أي قالب RNA. تتضمن مجموعة QIAGEN OneStep RT-PCR Kit محلول Q-Solution، وهو إضافة مبتكرة تُعدّل سلوك انصهار الأحماض النووية. يُسهّل محلول Q-Solution النسخ العكسي وتضخيم القوالب ذات المحتوى العالي من GC أو ذات البنية الثانوية المعقدة (انظر الشكل "RT-PCR لقالب غني بـ GC"). يُبسّط استخدام محلول Q-Solution عملية تحسين تفاعل RT-PCR للقوالب الصعبة. تتضمن مجموعة QIAGEN OneStep RT-PCR Kit كل ما يلزم لإجراء تفاعل RT-PCR أسرع وأسهل حتى في أكثر التطبيقات حساسية (انظر الجدول).

إجراء

تتيح مجموعة QIAGEN OneStep RT-PCR إعدادًا سريعًا وسهلاً لتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR). أيًا كان التطبيق - سواءً كان الكشف عن الفيروسات، أو أبحاث التشخيص الجزيئي، أو تحليل التعبير الجيني - ما عليك سوى مزج جميع المكونات معًا في أنبوب واحد وتشغيل برنامج جهاز التدوير الحراري (انظر مخطط "إجراء OneStep RT-PCR"). يحتوي مزيج التفاعل على جميع الكواشف اللازمة لكل من النسخ العكسي وتفاعل البوليميراز المتسلسل؛ ولا يلزم إضافة أي شيء بعد بدء التفاعل (انظر الجدول).

التطبيقات

- الكشف عن الفيروسات
- تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي للخلايا المفردة
- تحليل التعبير الجيني

تُعد مجموعة QIAGEN OneStep RT-PCR مناسبة لتطبيقات RT-PCR مثل: