Qiagen، 211354، مجموعة QuantiFast Pathogen PCR +IC (400)

لتحضير 400 تفاعل بحجم 25 ميكرولتر: مزيج رئيسي، محلول تحكم داخلي مجفف بالتجميد، حمض نووي للتحكم الداخلي مجفف بالتجميد، محلول صبغة ROX، محلول صبغة عالي التركيز من ROX، ماء خالٍ من RNase، محلول تخفيف الحمض النووي، محلول منظم TE

سمات

- الكشف المتزامن عن هدف العامل الممرض والتحكم الداخلي
- مزيج رئيسي 5x لحساسية أعلى مع إدخال عينات أكثر
- التفسير الصحيح للنتائج السلبية لزيادة سلامة العملية
- الكشف الواضح عن إشارات الهدف الإيجابية الضعيفة
- بروتوكول سريع وعالمي على كل من أجهزة التدوير القياسية والسريعة

تفاصيل المنتج

صُممت مجموعات QuantiFast Pathogen +IC للكشف الحساس والسريع عن الأحماض النووية للمُمْرِضات باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (PCR) أو تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) بخطوة واحدة، وذلك باستخدام مجسات مُحددة التسلسل. ولضمان أعلى مستويات الأمان للعملية من خلال التفسير الصحيح لنتائج الكشف السلبية، تحتوي كل مجموعة على كواشف للكشف المتعدد في الوقت الحقيقي عن ما يصل إلى 4 أهداف مُمْرِضة يُحددها المستخدم (مثل الفيروسات، والبكتيريا، والفطريات، إلخ) بالإضافة إلى عنصر التحكم الداخلي (IC). يتوفر نوعان من المجموعات: مجموعة QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC للكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي، والتي تحتوي على قالب تحكم داخلي للحمض النووي الريبي، بالإضافة إلى مجموعة البادئات/المجسات الخاصة بعنصر التحكم الداخلي؛ أو مجموعة QuantiFast Pathogen PCR +IC للكشف عن الحمض النووي الفيروسي أو البكتيري أو الفطري، والتي تحتوي على قالب تحكم داخلي للحمض النووي، بالإضافة إلى مجموعة البادئات/المجسات الخاصة بعنصر التحكم الداخلي. مع كلتا المجموعتين، يُقدم ROX في أنبوبين بتركيزات مختلفة، مما يُتيح استخدامه على أي جهاز تقريبًا للكشف في الوقت الحقيقي. ولتسهيل الاستخدام، يُمكن تخزين المزيج الرئيسي في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية.

أداء

تُمكّن مجموعات QuantiFast Pathogen +IC من الكشف المتزامن عن الحمض النووي الريبي (RNA) أو الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) الفيروسي، بالإضافة إلى عنصر التحكم الداخلي المرفق، ضمن نطاق خطي واسع دون فقدان الحساسية عند إجراء التحليل المتعدد (انظر الشكلين: "الكشف الحساس عن فيروس نوروفيروس على جهاز Rotor-Gene Q" و"الخطية العالية والدقة في الكشف الأحادي والثنائي"). وقد طُوّر البروتوكول لإجراء تجارب دورات سريعة على معظم أجهزة التدوير الحراري بموثوقية عالية (انظر الشكلين: "الكشف الحساس عن فيروس الهربس البقري من النوع 1 على جهاز Rotor-Gene Q" و"الكشف الحساس عن فيروس الهربس البقري من النوع 1 على جهاز ABI 7500"). يُعزز التضخيم المُدمج لهدف العامل الممرض وعنصر التحكم الداخلي باستخدام مجموعات QuantiFast Pathogen +IC سلامة عملية الكشف عن العامل الممرض من خلال ضمان التفسير الصحيح للنتائج السلبية (انظر الشكل: "التفسير الصحيح للنتائج السلبية").

يُوفر محلول تخفيف الأحماض النووية QuantiTect، المرفق مع مجموعات الاختبار، استقرارًا لمعايير الحمض النووي الريبي (RNA) والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) أثناء التخفيف وإعداد التفاعل، ويمنع فقدان الأحماض النووية على الأسطح البلاستيكية، مثل الأنابيب أو رؤوس الماصات. يُمكّن هذا المحلول من تخفيف المعايير المستخدمة لتحديد كمية الأحماض النووية الفيروسية بشكل موثوق، مما يُتيح نطاقًا خطيًا واسعًا، من قيم العتبة المنخفضة إلى العالية. كما يضمن المحلول تخزين المعايير لفترة أطول دون تدهورها (انظر الشكل "التخفيف والتخزين الموثوق لمعايير الحمض النووي الريبي").

مبدأ

مكونات المجموعة: الميزات
مزيج كوانتي فاست الرئيسي لتفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف عن مسببات الأمراض 5x: مزيج رئيسي مركز
بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq Plus: تنشيط لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية
محلول كوانتي فاست المضاد للميكروبات: مزيج متوازن من أيونات الأمونيوم (NH4+) والبوتاسيوم (K+).
عامل التركيب MP: تحليل متعدد موثوق به لما يصل إلى 4 جينات في نفس الأنبوب
مادة Q-Bond المضافة الفريدة: أوقات تشغيل أسرع لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، مما يتيح الحصول على نتائج أسرع وإجراء المزيد من التفاعلات يوميًا.
اختبار التحكم الداخلي: قالب التحكم الداخلي
عنصر تحكم داخلي في الحمض النووي الريبوزي (RNA) ضمن مجموعة QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC: عنصر تحكم عالمي لتضخيم الحمض النووي الريبوزي (RNA) يمكن استخدامه مع فحوصات مختلفة للكشف عن مسببات الأمراض.
اختبار التحكم الداخلي: مجموعة البادئات/المجسات المختلطة مسبقًا (مجس TaqMan®) الموسومة بـ MAX (ما يعادل HEX، VIC، إلخ).
مكونات إضافية للمجموعة: مزيج كوانتي فاست لاختبار RT للكشف عن مسببات الأمراض*
محلول صبغة ROX: أنبوب منفصل من صبغة مرجعية سلبية لمعايرة الإشارات الفلورية على أنظمة تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي Applied Biosystems 7500. اختياري: يمكن استخدامه على أجهزة Stratagene من Agilent.
محلول صبغة High-ROX: أنبوب منفصل من صبغة مرجعية سلبية لمعايرة الإشارات الفلورية على أنظمة Applied Biosystems 7900 و StepOne للتفاعل التسلسلي للبوليميراز في الوقت الحقيقي
محلول تخفيف الأحماض النووية QuantiTect: تركيبة محلول خاصة لتخفيف وتخزين معايير الأحماض النووية

لضمان أعلى مستويات السلامة في العملية من خلال التفسير الصحيح للنتائج السلبية، تحتوي كل مجموعة QuantiFast Pathogen_IC على كواشف للكشف المتعدد والفوري عن هدف ممرض محدد من قبل المستخدم باستخدام عنصر التحكم الداخلي. إن تضخيم جينات التحكم والهدف في نفس التفاعل، بدلاً من تفاعلات منفصلة، ​​يزيد من موثوقية تحديد كمية الجينات عن طريق تقليل أخطاء المعالجة.

توفر مجموعات QuantiFast Pathogen +IC كشفًا حساسًا وسريعًا للأحماض النووية المسببة للأمراض بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد في الوقت الحقيقي أو بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي أحادي الخطوة من المحاولة الأولى (انظر مخطط "مجموعات QIAGEN المتعددة"). يضمن المزيج الرئيسي المُحسَّن تضخيم نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد بنفس الكفاءة والحساسية التي تُضخَّم بها نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل في تفاعل التضخيم الأحادي المقابل. يحتوي محلول تفاعل البوليميراز المتسلسل السريع المُطوَّر خصيصًا على المادة المضافة الجديدة Q-Bond، التي تُقلل بشكل كبير من أوقات التمسخ والتهجين والاستطالة (انظر الشكل "تهجين البادئات السريع"). يُعزز مزيج متوازن من أيونات البوتاسيوم (K+) والأمونيوم (NH4+)، بالإضافة إلى العامل الاصطناعي الفريد MP، تهجينًا مستقرًا وفعالًا للبادئات والمجسات مع قالب الحمض النووي، مما يُتيح كفاءة عالية لتفاعل البوليميراز المتسلسل (انظر الشكل "محلول تفاعل البوليميراز المتسلسل الفريد"). بالإضافة إلى ذلك، تضمن التركيبة الفريدة لـ Sensiscript Reverse Transcriptase النسخ العكسي عالي الحساسية للحمض النووي الريبي الفيروسي، بينما يوفر HotStarTaq Plus DNA Polymerase بداية ساخنة صارمة، مما يمنع تكوين منتجات غير محددة.

إجراء

توفر مجموعات QuantiFast Pathogen +IC إجراءً بسيطًا للكشف عن مسبب مرض محدد من قبل المستخدم، بالإضافة إلى عنصر التحكم الداخلي. تحتوي هذه المجموعات على مزيج رئيسي جاهز للاستخدام للكشف الفوري عن الحمض النووي الريبي الفيروسي (RT-PCR بخطوة واحدة) أو الحمض النووي الفيروسي والبكتيري والفطري (PCR). لا حاجة لتحسين ظروف التفاعل أو دورات التفاعل. ما عليك سوى مزج المزيج الرئيسي المرفق مع اختبار مسبب المرض (البادئات والمسبار) واختبار عنصر التحكم الداخلي المرفق، بالإضافة إلى الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي لعنصر التحكم الداخلي. بدلاً من ذلك، إذا تمت إضافة عنصر التحكم الداخلي إلى إجراء تنقية العينة، أضف ماءً خاليًا من إنزيم RNase بدلاً من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي لعنصر التحكم الداخلي إلى مزيج التفاعل. ثم أضف عينة الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي وابدأ التفاعل على أي جهاز تدوير. يحتوي دليل المجموعة على بروتوكولات مُحسَّنة للاستخدام مع مسابير TaqMan® على نطاق واسع من أجهزة التدوير. كما يحتوي على توصيات لاختيار تركيبات الأصباغ.

تحتوي كل مجموعة QuantiFast Pathogen +IC على اختبار التحكم الداخلي وحمض نووي DNA أو RNA للتحكم الداخلي، وذلك لاستخدامه كعنصر تحكم في التضخيم عبر إضافته مباشرةً إلى مزيج التفاعل. كما يمكن إضافة عنصر التحكم الداخلي إلى عملية التنقية للتحكم في كلٍ من عملية التنقية والتضخيم. لإضافة عنصر التحكم الداخلي إلى عملية التنقية، يمكن طلب حمض نووي DNA أو RNA عالي التركيز (تركيز عالٍ) بشكل منفصل (انظر الشكل "QIAGEN Internal Control").

التطبيقات

توفر مجموعات QuantiFast Pathogen +IC تفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الحساسية في الوقت الحقيقي أو تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي أحادي الخطوة باستخدام مجسات محددة التسلسل للكشف عن الحمض النووي (DNA) و/أو الحمض النووي الريبي (RNA) للمُمْرِضات، بما في ذلك عنصر تحكم داخلي. يمكن استخدام هذه المجموعات على نطاق واسع من أجهزة التدوير الحراري في الوقت الحقيقي، بما في ذلك أجهزة QIAGEN وApplied Biosystems وBio-Rad وRoche (باستثناء أجهزة التدوير الحراري الشعيرية) وAgilent.