شركة كياجين، 211822، مجموعة الكشف عن خلايا سيرتال CHO (100)

لتحضير 100 تفاعل بحجم 25 ميكرولتر لكل منها: 1.25 مل من مزيج Certal Residual DNA PCR Master Mix، وCertal Internal Control DNA and Assay، وCHO DNA Positive control and CHO-Assay، و100 ميكرولتر من إنزيم Uracil-N-Glycosylase، و210 ميكرولتر من محلول صبغة High-ROX، و210 ميكرولتر من محلول صبغة ROX، ومحلول تخفيف الأحماض النووية، ومحلول TE
عرض المزيد

سمات

- حد منخفض للقياس الكمي مع قابلية تكرار ممتازة
- نطاق خطي عالٍ
- نظام تحكم داخلي موثوق ودقيق
- بروتوكولات مُحسّنة لمجموعة واسعة من أجهزة التدوير في الوقت الحقيقي
- مجموعات كاملة تشمل التحكم الداخلي والتحكم الإيجابي

تفاصيل المنتج

عند العمل مع المستحضرات الصيدلانية الحيوية، من الضروري تقييم المادة العلاجية النهائية للتأكد من خلوها من المواد الملوثة، مثل الحمض النووي المتبقي من الخلية المضيفة. صُممت مجموعات Certal للكشف عن الحمض النووي المتبقي لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الوقت الحقيقي، وذلك لتحديد كمية الحمض النووي الجينومي المتبقي من الخلية المضيفة بدقة وسرعة عاليتين، باستخدام مجسات التحلل المائي ثنائية التسمية (المعروفة أيضًا باسم TaqMan®). تحتوي مجموعة Certal للكشف عن خلايا CHO على كواشف للكشف المزدوج عن الحمض النووي المتبقي من الخلية المضيفة CHO باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي، بالإضافة إلى عنصر التحكم الداخلي Certal. تتضمن المجموعة أيضًا عنصر التحكم الإيجابي Certal للكشف عن الحمض النووي المتبقي، والذي يتحقق من فعالية فحص تفاعل البوليميراز المتسلسل في غياب إشارة من الحمض النووي للخلية المضيفة CHO، ونوعين من صبغة ROX المرجعية السلبية بتراكيز مختلفة، مما يتيح استخدامها على أي جهاز تقريبًا يعمل بتقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي.

أداء

تُمكّن مجموعات الكشف عن الحمض النووي المتبقي من Certal من الكشف الحساس والموثوق عن الحمض النووي الجينومي المتبقي (gDNA) وتحديد كميته، وهو أمر ضروري لإنتاج المستحضرات الصيدلانية الحيوية الآمنة والموثوقة (انظر الشكل "كشف عالي الحساسية والموثوقية"). تكشف مجموعة الكشف عن خلايا CHO من Certal عن الحمض النووي الجينومي المتبقي من خلايا مبيض الهامستر الصيني (CHO) بحد كشف منخفض ونطاق خطي واسع، مما يضمن الكشف الموثوق حتى عن المستويات المنخفضة من الحمض النووي الجينومي المتبقي (انظر الشكل "حد كشف منخفض"). تتوافق مجموعات الكشف عن الحمض النووي المتبقي من Certal مع مجموعة واسعة من أجهزة التدوير الحراري، مما يوفر بيانات حساسة وموثوقة (انظر الشكلين "كشف حساس وموثوق على مجموعة واسعة من أجهزة التدوير الحراري" و"كشف حساس وموثوق عن الحمض النووي الجينومي لخلايا CHO على جهاز Rotor-Gene Q").

لضمان أعلى مستويات السلامة في عملية التحليل، تتضمن مجموعات الكشف عن الحمض النووي المتبقي من Certal عنصر التحكم الداخلي من QIAGEN، المصمم خصيصًا لتمكين التفسير الصحيح للنتائج السلبية وعدم التأثير على التحليل المستهدف. يتم الكشف عن عنصر التحكم الداخلي من QIAGEN بشكل موثوق عند تضخيمه مع الحمض النووي الجينومي (انظر الشكل "الكشف الموثوق عن عنصر التحكم الداخلي من QIAGEN").

مبدأ

المكون: الميزات
فحوصات الحمض النووي المتبقي وعينة التحكم من الحمض النووي
اختبار الحمض النووي المتبقي 50x Certal: مجموعة بادئات ومجسات مصممة مسبقًا ومحسّنة ومعتمدة (موسومة بـ FAM)
عينة تحكم إيجابية للحمض النووي المتبقي من سيرتال: عينة تحكم إيجابية من الحمض النووي سيتم تضخيمها بواسطة اختبار الحمض النووي المتبقي من سيرتال
اختبار التحكم الداخلي سيرتال 50x: مجموعة بادئات ومجسات مصممة مسبقًا ومحسّنة ومعتمدة (موسومة بـ MAX) للكشف عن الحمض النووي للتحكم الداخلي سيرتال
الحمض النووي للتحكم الداخلي من سيرتال: الحمض النووي للتحكم الداخلي الذي سيتم تضخيمه بواسطة فحص التحكم الداخلي من سيرتال
مزيج سيرتال ريس دي إن إيه الرئيسي لتفاعل البوليميراز المتسلسل
بوليميراز الحمض النووي HotStarTaq: تنشيط لمدة 15 دقيقة عند 95 درجة مئوية
محلول سيرتال ريس دي إن إيه لتفاعل البوليميراز المتسلسل: مزيج متوازن من أيونات كلوريد البوتاسيوم وكبريتات الأمونيوم
عامل التركيب MP: تحليل متعدد موثوق به لما يصل إلى 4 جينات في نفس الأنبوب
مزيج dNTP: يتضمن dUTP، الذي يحل جزئيًا محل dTTP ويتيح معالجة UNG اختيارية
مكونات إضافية
محلول صبغة ROX بتركيز 50x: أنبوب منفصل من صبغة مرجعية سلبية لمعايرة الإشارات الفلورية على أنظمة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي Applied Biosystems 7500. اختياري: يمكن استخدامه على أجهزة Stratagene من Agilent.
محلول صبغة High-ROX بتركيز 50x: أنبوب منفصل من صبغة مرجعية سلبية لمعايرة الإشارات الفلورية على أنظمة Applied Biosystems 7900 و StepOne للتفاعل التسلسلي للبوليميراز في الوقت الحقيقي
يوراسيل-إن-جليكوزيلاز (UNG): أنبوب منفصل من إنزيم معاد التركيب نقي وخالٍ من النيوكلياز
محلول تخفيف الأحماض النووية QuantiTect: تركيبة محلول خاصة لتخفيف وتخزين معايير الأحماض النووية

لضمان خلوّ المادة العلاجية النهائية من أي مواد ملوثة من سلالة الخلايا المضيفة المستخدمة في إنتاج المستحضرات الصيدلانية الحيوية، توفر مجموعات Certal للكشف عن الحمض النووي المتبقي اختبارًا مُصممًا مسبقًا للكشف تحديدًا عن الحمض النووي لخلايا CHO المضيفة. يتكون كل اختبار من Certal للكشف عن الحمض النووي المتبقي من زوج من البادئات المُحسّنة ومسبار تحلل مُوسوم بـ FAM للكشف الموثوق عن الحمض النووي الجينومي المتبقي لخلايا CHO. لن يتداخل الحمض النووي البشري الخلفي أو الحمض النووي للتحكم الداخلي من Certal مع اختبار Certal للكشف عن الحمض النووي المتبقي.

يحتوي اختبار التحكم الداخلي Certal المُجهز مسبقًا على بادئ أمامي وبادئ عكسي ومسبار تحلل مُوسَم بـ MAX للكشف عن الحمض النووي للتحكم الداخلي Certal. وقد تم تحسينه خصيصًا لمنع التداخل مع اختبارات الحمض النووي المتبقي Certal. يُمكّن عنصر التحكم الإيجابي للحمض النووي المتبقي Certal من التفسير الصحيح للنتائج السلبية عن طريق اختبار فعالية تفاعل التضخيم نفسه.

تم تحسين تركيبة محلول Certal ResDNA PCR Buffer لتقديم نتائج كمية دقيقة وموثوقة لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ثنائي الاتجاه في الوقت الحقيقي. يحتوي المزيج الرئيسي أيضًا على dUTP، مما يسمح بالمعالجة المسبقة باستخدام إنزيم يوراسيل-N-جليكوزيلاز (UNG) قبل بدء تفاعل PCR لضمان عدم تأثير أي منتجات PCR ملوثة على تفاعلات PCR اللاحقة.

إجراء

الجهاز: محلول صبغة روكس
غير مطلوب: محلول صبغة روكس
روتور-جين كيو: إكس
روتور-جين 6000 وروتور-جين 3000: X
Applied Biosystems 7500، ABI ViiA7: X
أجهزة Applied Biosystems 7900HT و StepOne و StepOne Plus و ABI PRISM 7700 و 7000 و 7300: X
Mx3000P، Mx3005P، Mx4000: X
نظام iCycler iQ: X
لايت سايكلر 480: إكس

توفر مجموعات الكشف عن الحمض النووي المتبقي من سيرتال إجراءً بسيطًا للكشف عن الحمض النووي للخلايا المضيفة، وعينة التحكم الداخلي من سيرتال، وعينة التحكم الإيجابي للحمض النووي المتبقي من سيرتال (انظر الشكل: إجراء مجموعة الكشف عن الحمض النووي المتبقي من سيرتال). ما عليك سوى مزج المزيج الرئيسي المرفق مع اختبار الحمض النووي المتبقي من سيرتال، واختبار عينة التحكم الداخلي من سيرتال، وحمض سيرتال النووي للتحكم الداخلي، ثم إضافة عينة الحمض النووي الخاصة بك أو عينة التحكم الإيجابي للحمض النووي المتبقي من سيرتال. يحتوي دليل المجموعة على بروتوكولات مُحسَّنة للاستخدام على نطاق واسع من أجهزة التدوير الحراري. يُزوَّد محلول ROX في أنبوبين بتركيزين مختلفين، مما يتيح استخدامه على أي جهاز يعمل في الوقت الحقيقي (انظر الجدول: اختيار تركيز ROX المناسب).

التطبيقات

تتيح مجموعات الكشف عن الحمض النووي المتبقي من شركة Certal إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عالي الحساسية في الوقت الحقيقي باستخدام مجسات محددة التسلسل للكشف عن الحمض النووي للخلايا المضيفة، بما في ذلك عنصر تحكم داخلي. يمكن استخدام هذه المجموعات على نطاق واسع من أجهزة التدوير الحراري في الوقت الحقيقي، بما في ذلك أجهزة من شركات QIAGEN وApplied Biosystems وBio-Rad وRoche وAgilent.