شركة كياجين، 216513، مجموعة فاست لين سيل مالتيبلكس (200) icon_0368_ls_gen_eco_friendly-s

مجموعة محلول التخزين المؤقت FastLane Cell One-Step Buffer Set، ومزيج QuantiTect Multiplex RT-PCR Master Mix (يحتوي على صبغة ROX)، ومزيج QuantiTect Multiplex RT Mix

سمات

- لا حاجة لتنقية الحمض النووي الريبي، مما يوفر الوقت بشكل كبير
- ثلاث خطوات فقط من الخلايا إلى تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي في الوقت الحقيقي
- تحليل عالي الإنتاجية لألواح 96 و 384 بئراً
- يتيح محلول إزالة الحمض النووي الجينومي الفريد الكشف عن الحمض النووي الريبوزي فقط
- بدء تشغيل فوري باستخدام الكواشف والبروتوكولات المُحسّنة

تفاصيل المنتج

تُسرّع مجموعات FastLane Cell RT-PCR وتُبسّط عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي في الوقت الحقيقي، وهي مثالية للتجارب التي تتطلب تحليلًا سريعًا وعالي الإنتاجية للتعبير الجيني. توفر هذه المجموعات مجموعة من المحاليل المنظمة لتحضير مستخلصات FastLane من الخلايا المستنبتة. بالإضافة إلى تحليل الخلايا، تعمل هذه المحاليل المنظمة أيضًا على تثبيت الحمض النووي الريبوزي الخلوي (RNA) وإزالة الحمض النووي الجينومي (DNA). تُستخدم مستخلصات FastLane مباشرةً في تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي أحادي الخطوة في الوقت الحقيقي، وفي تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي متعدد الأهداف أحادي الخطوة في الوقت الحقيقي. تتوفر مجموعة متنوعة من صيغ الكشف، بما في ذلك الكشف الأحادي باستخدام صبغة SYBR Green أو مجسات محددة التسلسل، أو الكشف المتعدد باستخدام مجسات محددة التسلسل (مع أو بدون صبغة ROX المرجعية السلبية).

أداء

تستخدم مجموعة FastLane Cell SYBR Green Kit محلولًا فريدًا لتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) لمنع تكوّن نواتج غير نوعية وثنائيات البادئات، مما يسمح بالقياس الكمي عالي الدقة في تفاعل RT-PCR أحادي الخطوة في الوقت الحقيقي. كما يتم تحقيق قياس كمي حساس حتى في غياب خطوة تنقية الحمض النووي الريبوزي (انظر الشكل "الكشف الحساس بدون تنقية الحمض النووي الريبوزي"). وتتميز نتائج التجارب عالية الإنتاجية بقابلية تكرار عالية (انظر الشكل "تحليل قابل للتكرار بدرجة عالية للوحة 96 بئرًا")، ولا تتأثر بتلوث الحمض النووي الجينومي.

توفر مجموعة FastLane Cell Probe Kit كشفًا حساسًا قائمًا على المجسات في تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) بخطوة واحدة في الوقت الحقيقي، دون الحاجة إلى تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA). يتميز القياس الكمي في الوقت الحقيقي بحساسية وخطية أعلى مقارنةً بالمجموعات المماثلة (انظر الشكل "الكشف الخطي حتى مستوى الخلية الواحدة")، كما أنه قابل للتكرار بدرجة عالية (انظر الشكل "تحليل قابل للتكرار بدرجة عالية للوحة 384 بئرًا"). إضافةً إلى ذلك، لا يتداخل الحمض النووي الجينومي مع القياس الكمي. مع مجموعات FastLane Cell Multiplex Kits، يصبح التحليل المتعدد في تنسيقات 96 و384 بئرًا قابلًا للتكرار بدرجة عالية (انظر الشكل "تحليل متعدد قابل للتكرار بدرجة عالية للوحة 96 بئرًا"). تُعد هذه المجموعات مثالية لتحليل التعبير الجيني السريع وعالي الإنتاجية، مثل التحقق من صحة إسكات الجينات بوساطة الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) (انظر الشكل "التحقق الموثوق من إسكات الجينات"). يتم تضخيم الجينات المستهدفة وجينات التحكم في نفس التفاعل بكفاءات PCR عالية مماثلة، مما يتيح التحديد الكمي النسبي بواسطة طريقة ΔΔC t.

مبدأ

تستخدم مجموعات FastLane Cell RT-PCR تقنية FastLane لتحضير مستخلصات الخلايا لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) بخطوة واحدة في الوقت الحقيقي، بالإضافة إلى تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي المتعدد بخطوة واحدة في الوقت الحقيقي. تعمل هذه المجموعات على تسريع وتبسيط تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي للخلايا المستنبتة من خلال الاستغناء عن تنقية الحمض النووي الريبوزي (RNA)، كما توفر نتائج قابلة للتكرار في التحليل عالي الإنتاجية، مما يسهل معالجة صفائح 96 أو 384 بئراً.

يضمن استخدام مجموعة FastLane Cell SYBR Green Kit الكشف عن النسخ الجينية المحددة في تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) للخلايا عند استخدام المجموعة مع فحوصات QuantiTect Primer Assays. هذه عبارة عن مجموعات بادئات مصممة مسبقًا تغطي كامل الجينوم، وهي متوفرة لدى GeneGlobe.

تتوافق جميع أنواع كيمياء المجسات مع مجموعة FastLane Cell Probe Kit، بما في ذلك مجسات التحلل المائي (مثل TaqMan® أو غيرها من المجسات ثنائية التسمية)، ومجسات التهجين بتقنية LightCycler (FRET)، والمجسات الجزيئية. يُغني مزيج RT-PCR الرئيسي الجاهز للاستخدام، والذي يحتوي على محلول منظم RT-PCR جديد وبوليميراز DNA ذي بدء ساخن، عن الحاجة إلى ضبط تركيز المجسات ومعايير تفاعل البوليميراز المتسلسل الأخرى.

تُعدّ مجموعات FastLane Cell Multiplex مثاليةً لتحليل التعبير الجيني السريع وعالي الإنتاجية، مثل التحقق من صحة تثبيط الجينات بواسطة siRNA. على عكس الطرق الأخرى، تُحقق مجموعات FastLane Cell Multiplex نجاحًا في تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) متعدد القنوات في الوقت الحقيقي بخطوة واحدة من المحاولة الأولى (انظر الشكل "تحليل متعدد القنوات بدون خطوات تحسين")، وذلك بفضل مزيج رئيسي مُحسَّن يحتوي على محلول منظم جديد لتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) وإنزيم بوليميراز الحمض النووي ذي بدء التشغيل الساخن. يتوفر نوعان من المجموعات: مجموعة FastLane Cell Multiplex لأجهزة التدوير الحراري التي تتطلب صبغة ROX لتطبيع الفلورة، ومجموعة FastLane Cell Multiplex NR لجميع أجهزة التدوير الحراري الأخرى.

إجراء

باستخدام مجموعات FastLane Cell RT-PCR، يتم الحصول على المستخلصات الخلوية في غضون 12 دقيقة فقط من خلال إجراء من ثلاث خطوات: غسل الخلايا؛ تحلل الخلايا مع تثبيت الحمض النووي الريبوزي (RNA) وإزالة الحمض النووي الجينومي؛ ومعالجة المستخلصات. بعد المعالجة، تصبح المستخلصات جاهزة للاستخدام في تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) أحادي الخطوة في الوقت الحقيقي، وتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي متعدد الأهداف أحادي الخطوة في الوقت الحقيقي.

تحتوي هذه المجموعات على كميات كافية من الكواشف لتحليل الخلايا في صفيحتين لزراعة الخلايا ذات 96 بئرًا، ثم إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي الكمي (RT-PCR) وتفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي المتعدد (بحجم 50 ميكرولتر). يمكن أيضًا استخدام هذه المجموعات لتحليل صفيحة واحدة لزراعة الخلايا ذات 384 بئرًا إذا تم تقليل حجم تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى 20 ميكرولتر. في حال الرغبة بحجم 50 ميكرولتر، يلزم شراء مجموعة إضافية من إحدى المجموعات التالية: QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (200)، أو QuantiTect Probe RT-PCR Kit (200)، أو QuantiTect Multiplex RT-PCR Kit (200)، أو QuantiTect Multiplex RT-PCR NR Kit (200).

التطبيقات

- التحقق من صحة تثبيط الجينات بوساطة الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير
- فحص الأدوية المحتملة
- الكشف عن تنظيم الجينات المحفز

تُعد مجموعات FastLane Cell RT-PCR مثالية للتجارب التي تتطلب تحليلًا سريعًا وعالي الإنتاجية للتعبير الجيني، مثل: