شركة كياجين، 217684، مجموعة miRNeasy المتقدمة للأنسجة/الخلايا (50) icon_0368_ls_gen_eco_friendly-s

لـ 50 عينة: أعمدة الطرد المركزي RNeasy UCP MinElute، وأعمدة الطرد المركزي gDNA Eliminator، وأنابيب التجميع، وماء خالٍ من إنزيم RNase، ومحاليل منظمة.

سمات

- بروتوكول خالٍ من الفينول – لا حاجة لفصل الطور أو العمل تحت غطاء
- إجراء سريع ومريح بفضل الكيمياء المتقدمة وأعمدة إزالة الحمض النووي الجينومي
- إثراء فعال للـ miRNA والـ RNAs التي يقل طولها عن 200 نيوكليوتيد
- حمض نووي ريبوزي نقي ومتسق لجميع التطبيقات اللاحقة

تفاصيل المنتج

تُعدّ مجموعات miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits الجيل الثاني من مجموعات miRNeasy Kits المعروفة. تجمع هذه النسخ المُحسّنة بين تقنية كيميائية متطورة خالية من الفينول وأعمدة gDNA Eliminator أو ألواح gDNA 96 Eliminator لعزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) بشكل آمن ومريح. تُمكّن هذه المجموعات من تنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي، بما في ذلك جزيئات الحمض النووي الريبوزي الصغيرة التي يبلغ طولها 18 نيوكليوتيدًا أو أكثر، من أنسجة وخلايا الحيوانات، حتى في العينات الصغيرة. تستخدم هذه المجموعات أعمدة الطرد المركزي لتنقية الحمض النووي الريبوزي بكميات قليلة. يمكن أتمتة مجموعة miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kit على جهاز QIAcube Connect.

أداء

تُعدّ مجموعات miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits بدائل خالية من الفينول لمجموعات miRNeasy التقليدية، دون المساس بكمية وجودة الحمض النووي الريبوزي (انظر الأشكال "استخلاص عالي للحمض النووي الريبوزي الميكروي دون الحاجة إلى الفينول"، و"استخلاص عالي لـ miR16 من الأنسجة والخلايا دون الحاجة إلى الفينول باستخدام miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro"، و"استخلاص عالي للحمض النووي الريبوزي الميكروي دون استخدام الفينول باستخدام مجموعة miRNeasy 96 Tissue/Cell Advanced Kit"). تُمكّن مجموعات miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits من إثراء الحمض النووي الريبوزي بكفاءة عالية حتى حجم 18 نيوكليوتيدًا تقريبًا.

تُنقي مجموعة miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro Kit الحمض النووي الريبوزي (RNA) بكفاءة من 5 ملغ من الأنسجة المجمدة أو 1 × 10⁶ خلية، كما أنها تعمل مع كميات أقل بكثير من المادة الأولية. أما مجموعة miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kit فتُنقي الحمض النووي الريبوزي (RNA) بكفاءة من 30 ملغ من الأنسجة المجمدة أو 1 × 10⁷ خلية. ويمكن معالجة ما يصل إلى 50 ملغ من الأنسجة و1 × 10⁷ خلية باستخدام مجموعة miRNeasy 96 Tissue/Cell Advanced Kit ذات 96 بئراً.

تتضمن مجموعات miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits إجراء gDNA Eliminator الذي يسمح بإنتاج كميات كبيرة من الحمض النووي الريبوزي (RNA) قابلة للتكرار، وإزالة فعالة للحمض النووي الجينومي (gDNA) للتطبيقات الحساسة (انظر الأشكال "مجموعة miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kit تُظهر أداءً أعلى"، و"استخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي: إزالة فعالة للحمض النووي الجينومي"، و"ألواح gDNA 96 Eliminator تضمن إزالة فعالة للحمض النووي الجينومي"). يتم الحصول بشكل روتيني على الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) بقيم Agilent RIN أو QIAxcel Connect System RIS قريبة من 10 من الأنسجة والخلايا المستنبتة. على عكس مجموعات الموردين الآخرين، تجمع مجموعات miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits بين سهولة الاستخدام وبروتوكول خالٍ من الفينول دون أي تأثير سلبي على جودة أو كمية الحمض النووي الريبوزي (RNA) (انظر الأشكال "مجموعة miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kit تُظهر أداءً أفضل مقارنةً بمجموعات الموردين الآخرين"، و"أداء تنافسي"، و"إجراء سريع"، و"مجموعة miRNeasy 96 Tissue/Cell Advanced Kit تُقدم أداءً ممتازًا").

مبدأ

تجمع مجموعات miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits بين تحلل العينة باستخدام الغوانيدين، وخطوة إزالة المثبطات، وتنقية الحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) باستخدام غشاء السيليكا، والذي يشمل الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) وأنواع أخرى من الحمض النووي الريبوزي الصغير. يحتوي محلول RLT المرفق مع المجموعة على ثيوسيانات الغوانيدين، مما يُسهّل تحلل وتفكيك إنزيمات RNase والبروتينات الأخرى. لذلك، يكون الحمض النووي الريبوزي في العينات المُحللة في محلول RLT مستقرًا ومحميًا من التحلل.

إجراء

يتم تحليل العينات بإضافة محلول RLT إلى عينات الأنسجة أو الخلايا، متبوعًا بتفتيت وتجانس دقيقين لضمان التحلل الكامل وتعطيل إنزيمات RNase (انظر الشكل "إجراء مجموعة miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kit"). بعد ذلك، يُضاف محلول AL إلى المستخلص لتحسين إزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) بواسطة عمود gDNA Eliminator Spin Column أو لوحة gDNA 96 Eliminator Plate. يُضاف محلول RPP إلى السائل المتدفق لترسيب المثبطات (معظمها بروتينات عالية التركيز في عينات الأنسجة والخلايا، والتي قد تتداخل مع عزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) أو التحليل اللاحق) عن طريق الطرد المركزي. في حالة مجموعة miRNeasy 96 Tissue/Cell Advanced Kit، تُضاف خطوة بروتينيز K لإزالة البروتينات. يُنقل السائل الطافي الذي يحتوي على الحمض النووي الريبوزي الكلي إلى أنبوب تفاعل جديد، ويُضاف إليه الإيزوبروبانول لتوفير ظروف ارتباط مناسبة لجميع جزيئات الحمض النووي الريبوزي التي يبلغ طولها 18 نيوكليوتيدًا أو أكثر. تُوضع العينة بعد ذلك على عمود RNeasy Mini Spin Column (miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini)، أو عمود RNeasy UCP MinElute Spin Column (miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro)، أو على صفيحة RNeasy® 96 Plate (miRNeasy 96 Tissue/Cell Advanced)، حيث يرتبط الحمض النووي الريبوزي الكلي بالغشاء وتُزال جميع الملوثات بكفاءة. يُستخلص الحمض النووي الريبوزي عالي الجودة، بما في ذلك الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) وأنواع الحمض النووي الريبوزي الصغيرة الأخرى، في كمية صغيرة من الماء الخالي من إنزيم RNase.

التطبيقات

تتيح مجموعات miRNeasy Tissue/Cells Advanced Kits تنقية الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) والحمض النووي الريبوزي الكلي (RNA) لمجموعة متنوعة من التطبيقات، بما في ذلك:

• تسلسل الحمض النووي الريبوزي (RNA-seq) • تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (RT-PCR) • تحليل المصفوفات الدقيقة • تحليل النقل الشمالي